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Óxido Nítrico Sintetase

Óxido Nítrico Sintetase. E o seu papel na inflamação. OXIDO NITRICO SINTASE ENDOTELIAL. INFLAMACAO - defesa do organismo comum em muitas patologias aparentemente distintas.

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Óxido Nítrico Sintetase

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Presentation Transcript

  1. Óxido Nítrico Sintetase E o seu papel na inflamação

  2. OXIDO NITRICO SINTASE ENDOTELIAL • INFLAMACAO - defesa do organismo comum em muitas patologias aparentemente distintas. • PROCESSOINFLAMATORIO - eh iniciado por complexas series de eventos, sendo os passos prévios fundamentais mudanças vasculares que começam imediatamente e se desenvolvem nas primeiras horas. • eNOS (oxido nítrico sintase endotelial) e NO (oxido nítrico) • ligados a permeabilidade vascular • envolvidos na inflamação

  3. Histamina 5-HT Bradicinina Prostaglandinas Óxido nítrico (NO) Citocininas inflamatórias Fatores de crescimento Mediadores envolvidos em mudanças na permeabilidade vascular

  4. Mediadores iniciais Histamina liberados rapidamente armazenados nas células 5 – HT

  5. Fator de necrose tumoralinduziNOSproduzóxido nítrico (NO)aumenta a permeabilidade vascular

  6. Tipos de óxido nítrico sintetase • Óxido nítrico sintetase neural (nNOS) • Óxido nítrico sintetase endotelial (eNOS) • Óxido nítrico sintetase indutível (iNOS)

  7. Óxido Nítrico Sintetases - NOS • NO é gerado pelo metabolismo da Arginina Arginine  +  Ca2+ +  Nitric Oxide Synthase      Nitric Oxide

  8. Óxido Nítrico Sintetases - NOS • 3 Formas: Neural (n-NOS) Endotelial (e-NOS) Indutível (i-NOS)

  9. Óxido Nítrico Sintetases - NOS • i-NOS - Contolada por mediadores inflamatórios e citocinicas - Produz quantidades (desreguladas) de NO • e-n-NOS - Produzem quantidades

  10. Características desta enzimas • Estrutura tridimensional • e-n-NOS contém sítios autoinibitório que é regulador da sensibilidade de Ca++ • Possui um N-terminal que corresponde ao sítio de ligação para vários grupos, como: heme, arginina e hidrobiopterina (BH4). Estes grupos são ligados através de seu carbono terminal ao N-terminal e tal ligação é regulada por calmodulina.

  11. eNOS: Uma Enzima de Indução

  12. Aumento da concentração de eNOS em células endoteliais humanas: • Fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF); • Modulador de receptor de estrógeno seletivo; • Exercícios físico (aumenta a expressão de RNAm que codifica eNOS; • Neurite autoimune (células endoteliais e de Schwann nos nervos ciáticos).

  13. Reguladores de eNOS: • Dinâmicos alvos subcelulares; • Interações de proteína-proteína; • Fosforilações; • Estimulação de Ca2+ dependente-independente; • Autocóides (danos no tecido e mudança do fluxo sanguíneo).

  14. Reguladores da atividade de eNOS • CAV-1- Forma um inibidor fisiológico de e-NOS. É uma proteína que regula respostas vascvulares a NO. • CaM e CaM co-imunoprecipates • HSP90 (Heat shock protein 90) – Liga ao NO e NOS o ativa. Aumenta a sua atividade e a liberação de NO. Influencia a fosforilação e a junção de e-NOS ao HSP 90 e CaM

  15. Fosforilação proteíca • e-NOS é primariamente fosforilada em resíduos de serina, tirosina treonina. A serina cinase B fosforila diretamente e-NOS na 1177 Ser (e-NOS humano) que aumenta a atividade de e-NOS.

  16. Funções do e-NOS na Inflamação • e-NOS é fonte dinâmica de NO, abastecem as células constantemente • i-NOS produz grande quantidade de NO • Produz os efeitos Patológicos do NO

  17. Os 2 principais linhas de pesquisa • 1- in vitro ou admistração in vivo de NO exogénos • 2- Utilizando inibidores de NOS Pontos fracos

  18. Formas de Investigação • Usando e-NOS, i-NOS, n-NOS “inválidas” em camundongos • Microsópio intravital O nº de Rolagem de Leucócito = iNOS • Microscopia de Contraste Se há estimulação há de rolagem: i-NOS (2x) e eNOS (6x)

  19. Ferramentas farmacológicas Falta de seletividade dos inibidores para as isoformas; nNOs, eNOs e iNOs. Ação variável: local e tempo de ação Falta de estudos na regulação e modulação de Nos

  20. eNOs  Cav 1 HPS 90 e calmodulina (CaM) fosforilação de eNOs eNOs fosforilado forma ativa Ap-Cav (derivado Cav-1)  liga-se ao eNOs -anti-inflamatório inibindo o NO Drogas: Geldanamicina & Radicicol(efeito semelhante) Wortmannin & LY294002(efeito contrário) -inibe a fosforilação de eNOs fosfatidilinositol 3-cinase

  21. Síntese de eNOs(Cav 1)  síntese de Ap-Cav Inibe os efeitos: hemorragias,vasodilatação, edema, etc. Mecanismo de modulação -modificação estrutural da proteína, via Ap-Cav • inibição da fosforilação (fosfatidilinositol 3-cinase) pelas drogas(Wortmannin e LY294002).

  22. Considerações Finais

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