1 / 47

Boala von Willebrand

Boala von Willebrand. Robert Gosselin MT (ASCP), CLS. Boala von Willebrand ( B VW): diagnoză bazată pe simptome şi principii directoare privind tratarea , Institutul Naţional pentru Inimă, Plămâni şi Sânge (NHLBI) Raport Specializat ( S UA) ( Hemofilia 2008; 14:171-232 )

solstice
Download Presentation

Boala von Willebrand

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Boala von Willebrand Robert Gosselin MT (ASCP), CLS

  2. Boala von Willebrand (BVW): diagnoză bazată pe simptome şi principii directoare privind tratarea, Institutul Naţional pentru Inimă, Plămâni şi Sânge (NHLBI) Raport Specializat (SUA) (Hemofilia 2008; 14:171-232) Analiza Factorului von Willebrand: Ghid – Ediţia a II-a (H51-2) (în curs de desfăşurare)

  3. În 1924 Erik von Willebranda evaluat o fetiţă de 5 ani cu diateză hemoragică şi ca rezultat cei 66 membri ai familiei de pe coasta Finlandei şi a constatat: • Hemoragii mucocutanate • Patologie moştenită autosomal • Sângerări prelungite • Timp normal de coagulare • Nu este corectat cu transfuzii de sânge

  4. În 1950 deficienţa proteinei în plasmă a cauzat hemoragii prelungite A fost considerată “Factorul von Willebrand” O dată cu producerea crioprecipitatului şi a concentraţiilor Factorului 8, s-a constatat că acestea s-au complicat împreună

  5. FVW este produs în celulele endoteliale – sintetizat şi păstrat în corpusculii Weibel-Palade megacariocite – stocate în granulele alpha Se constituie din subunităţi identice pentru a forma şiruri lineare multimeri formaţi în complexul Golgi

  6. În timpul circulaţiei, FVW este conjugat cu F8 Pe leziune,FVW este supus unei modificări corespunzătoare şi aderă la ţesutul subendotelial sub influenţa unor condiţii limitate Plachetele aderă via GPIb-IX Timpul de înjumătăţire este de ~12 ore

  7. Multimerii FVW – Degradare datorită ADAMTS13 [Disintegrin şi Metaloproteinazăcu TromboSpondinde tipul 1, membrul 13] Deficienţa ADAMTS13 a fost asociată cu TTP

  8. Funcţiile FVW Hemophilia 2008; 14:177

  9. Boala von Willebrand Deficienţa proteinei în plasmă a factorului von Willebrand (FvW) Deficienţă cantitativă Deficienţă parţială de tip I Deficienţă totală de tip III Deficienţă calitativă (de tip II) Anomalie funcţională Braţ scurt al cromozomului 12

  10. Tipurile de Boală Von Willebrand • Tipul 1-autosomal dominant • Tipul 2-autosomal dominant • 2A (autosomalrecesiv) • 2B • 2M • 2N (autosomalrecesiv) • Tipul 3 (autosomal recesiv) • Pseudo-BVW-autosomal dominant • BVW dobândită

  11. Proteina FvW-Genă/mRNA/Domenii funcţionale

  12. Boala von Willebrand 1% dinpopulaţie cu FvW • 125/1,000,000 suferă de hemoragii semnificative • În Marea Britanie, 6294 au înregistrat pacienţi diagnosticaţi cu BvW, doar 10% au beneficiat de tratament în decursul anului 2001 Tipul I numără ~75% din toateBvWDx De la stare uşoară la gravă • Hx • Tendinţă de a face vânătăi foarte uşor • Hemoragii nazale • Hemoragii gingivale • Menoragii Variabilitatea Hemoragiei • De la uşoară la gravă

  13. Terminologie • BVW –boala von Willebrand • FVW –proteină von Willebrand matură • FVW:RCo –activitatea cofactorului ristocetină, ce măsoară activitatea proteinei FvW** • FVW:Ag –antigenul FVW • FVW:CB –analiza legăturii de colagen,o altă componentă afuncţiei FvW • FVIII:C –activitatea factorului VIII • FVW:FVIIIB -FvW- analiza legăturii factorului VIII • RIPA –agregarea plachetară indusă a ristocetinei • FVWpp –propeptida FvW Hemophilia 2008; 14:177

  14. Testele de Laborator privindBvW şideficienţa PLT

  15. Testul de bază (recomandat pentru primul strat) • Testele Screening • PT şiaPTT • PFA (Siemens)* sauTestarea trombocitelor (Laboratoarele Helena)* • Timpul FĂRĂ sângerare • FVW:RCo – măsoară activitatea • Ristocetinei induse • Ristocetinei independente • FVW:Ag – măsoară proteina • Proporţia FVW:RCo/FVW:Ag • F8 – la r/o tipul 2N * Pot lipsi anumite subtipuri de BVW

  16. Stratul al doilea (următor) • Analiza multimerilor – în cadrul tipului 2 suspectat • Agregarea ristocetinei • Doză mică (0.6mg/ml) • FVW:CBA – în cadrul tipului 2 suspectat • FVWpp – în variantele tipului 1 suspectat • Altele • DDAVP (desmopresin) • IV saunazal • Analiză moleculară • Anticorpi • Dobândit

  17. Factorii ce afectează nivelele FVW • Practicarea sportului • Stresul • Psihologic • Fiziologic • Timpul prelungit de aplicare a bandajului de compresie • Dietă?? • Altele • Graviditate, contraceptive orale, HRT • Traume • Procese inflamatorii

  18. Alţi factori ce influenţează nivelele FVW • Tipul mostrei • Este preferat citrat de sodiu de 3.2% • Media FVW:Agîn grupa de sânge** • Grupa O: 75 (36-157) • Grupa A: 106 (48-234) • Grupa B: 117 (57-241) • Grupa AB: 123 (64-238) • Utilizarea filtrelor pentru a obţine PPP ** Hemophilia 2008; 14:177

  19. Anticorpul anti-uman conjugat al FVW¤ FVW (+) Test Chromogenic Spălare Spălare Micro rezervor ce conţine anti-FVW ¤ + ¤ Colorare + ¤ +    ¤ ¤ ¤ + + + + + + Cantitatea de culoare trebuie să fie proporţională cantităţii de anticorpi prezenţi Incubare Incubare Testele ELISA şi LIA Reagenţi acoperiţi cu anti-FvW FvW al pacientului                Citirea instrumentului —modificări în densitatea optică secundare agregatelor   Incubare Rezervorul de testare

  20. Rezultatele în comparaţie cu curba Std Testele de aglutinare şi agregare a trombocitelor Plasma pacientului + Ristocetină Ristocetină1.2 mg/mL (l) & 0.6 mg/mL (r) Trombocitele şi plasma pacientului + Ristocetină Rezultatele în comparaţie cu restul populaţiei Zhou and Schmaier Am J Clin Pathol 2005;123:172-183

  21. FVW:RCo • Plasmă săracă în trombocite • Trombocite consolidate • Pregătite pentru a fi utilizate • Pot fi combinate cu ristocetină • Ristocetină • Iniţial utilizată în calitate de antibiotic • Peptide din Amycolatopsislurida • Considerată că contribuie la apariţia efectelor mimice ca rezultat al unui stres puternic

  22. Probleme legate de FVW:RCo Variabilitate • Dintre multitudinea de ristocetine • Dintre metodele reagenţilor Gradul de imprecizie nu este absolut (de la 15%) Nivel scăzut de sensibilitate • Utilizarea metodelor automatizate la nivel redus 15-20%

  23. Activitatea FVW Ristocetina independentă • Plasmă săracă în trombocite • Particule polimerice Latex acoperite cu anticorp monoclonal (anti-GPIb) • Determină domeniul funcţional al FVW • Metodele LIA şi ELISA • Poate reduce variabilitatea asociată cu FVW:RCo

  24. IL FVW:Act versus Siemens FVW:RCO

  25. IL FVW:Act versus Siemens FVW:RCo

  26. FVW:RCo versus RIPA FVW:RCo Măsoară activitatea FvW PLT exogene Ristocetină exogenă Aglutinarea trombocitelor Metodele ELISA(FVW:Act) Metodele LIA(FVW:Act) RIPA Măsoară interacţiunea dintre FvWşitrombocitele GP Plasma pacienţilor Trombocitele pacienţilor Ristocetină exogenă Agregarea trombocitelor FvW:RComăsoară doar plasma FvW, în timp ce RIPA măsoară atât plasma FvW, cât şi interacţiunea dintre FvW şi trombocite

  27. FVW:Ag • Majoritatea laboratoarelor utilizează sau testul ELISA, sau testul LIA • Testul ELISA … ore • Testul LIA … minute • Metoda tradiţională este electroforeza pe gel • Mai puţină variabilitate decât la FVW:RCo • Posibile efecte în “pre-zonă” sub influenţa metodelor automatizate (LIA) • Testul poate fi aplicat şi la alte indicaţii • Vasculita Rx

  28. FVW:CB • Metoda ELISA • Trombocite acoperite cu colagen de tip I sau tip III • Sursa ecvino-bovină • Corelare mai bună cu greutate moleculară mare (HMW) aFvW • Capacitate de re-producere mai bună decât la FvW:Rco • Detectare îmbunătăţită la nivele inferioare • Neaprobat de către Administraţia Alimentelor şi Medicamentelor din SUA • Păcat!!!

  29. Analiza legăturii de colagen Raport : FvW:AglaFvW:CB Favaloro, Am J Clin Pathol 2000;608-618 Type 1 VWD Type 2 VWD

  30. Analiza multimerică a FvW de tip II Favaloro, Thromb Haemost 2007; 98:346-358

  31. Propeptida FvW (FvW:pp) • Stocat în granule αsau corpusculiWeibel-Palade • În urma secreţiei în plasmă, t½: 2-3 ore • versus FvW matur t½: ~10 ore • Concentraţiile plasmei ~1μg/mL • versusFvW matur: 10 μg/mL • Studiile efectuate indică: • Raportul FvW:ppmărite la FvW:Agcu deficienţă genetică redusă aFvW:Agcu supravieţuire  FvW • Supravieţuirea  FvWar sugera de asemenea strategii alternative Rx

  32. Pseudo-BVW • Similară tipului 2 • Număr redus de trombocite • “Are avantaje în funcţie” • Agregare cu doză mică de ristocetină • Trebuie să efectuezeFVW:PB • Mărit faţă de BVW:2B • Normal cupsuedo-BVW • Receptor GPIbanormal

  33. From M Ledford-Kramer, Editor Clot-Ed

  34. Ghidul CLSI H51-2 • Recomandări referitor la • Tipul mostrei, procesare • Testare • Calibrare şi raportare a rezultatelor • Aceeaşi calibrare pentruFVW:ActşiFVW:Ag • Calibrare diferenţiată pentru terapeutică • Unităţi • Proporţii • Propuneri privind Implementarea/validarea ?? • Implementarea noii metode • Lot-la-lot

  35. BvW de tip I • Hxsemnificativ pentru hemoragiile mucocutanate • FvW:RCo, FvW:CB, FvW:Ag sunt <50 IU/ml • Raportul FvW:RCo/FvW:Ag >0.7 • Numărul de PLT (trombocite) Normal • Analiza multimericănormală • Activitatea Factorului VIII normal/ • RIPA e redusă • PFA C.T. ca regulă, BT puţin mai bine decât “moneda” • Supravieţuirea proptidelor??

  36. BvW de tip 2A • Variantă limitată cu funcţia PLT-dependenteîn absenţa multimerilor de greutate moleculară mare • Două tipuri de mutaţii • Grupul 1: circulaţie deficitară intracelulară, reţinere  a multimerilor considerabili în ER • Grupul 2: susceptabilitate mărită laproteolizaFvW,  multimeri largi • Malinterpretare, ştergeri, inserări • Anamneză clinică (personalăsau familială) hemoragie (mucosal)

  37. BvW de tip 2A • Constatările de Laborator • Număr de PLT Normal • FvW:RCo scăzut • FvW:CBredus • Activitatea factorului VIII normală/ • FvW:Agca regulă normal/  • RaportulFvW:RcosauvWF:CBAlavWF:Ageste <0.7 • RIPA este redusă • PFA C.T. de obicei • Absenţa multimerilor cu greutate moleculară mare

  38. BvW de tip 2B • Variantă modificată cu “avantaj în funcţie” • Afinitate crescută pentru GpIb plachetară • 4 mutaţii (substituiri nucleotide) în cadrul FvWA1 ce numără ~90% de tip IIb • Parametri de laborator similari ca şi în cazul pseudo- BvW • Anamneză clinică (personalăsau familială) hemoragie (mucosal)

  39. BvW de Tip 2B • Constatările de laborator • Numărul  PLT este de la normalla scăzut • FvW:RCoeste redus (de obicei) • FvW:CBAeste scăzut (de obicei) • Activitatea factorului VIII este normală/ • FvW:Ageste ca regulă normal/  • Raportul FvW:Rco sau FvW:CBA la vWF:Ag este <0.7 • RIPA este • Doză mică de ristocetină (0.75 mg/mL) • PFA---normal la • Absenţa multimerilor cu greutate moleculară mare

  40. Pseudo- BvW • Mutaţii în complexul GpIb-IX la nivel plachetar • Manifestări clinice variabile ale Hemoragiei • Parametri de laborator similari ca şi în cazul tipului 2B: • Trombocitopenie variabilă • RIPA mărit • Număr redus de multimeri cu greutatea moleculară mare

  41. Constatările de laborator diferenţiate: TipulIIb versus Pseudo-BvW • Cantitatea normală de PLT în cazul mostrei tipului IIb: • RIPA mărită • Cantitatea normală de Crioprecipitatîn cazul pseudo-BvW • Agregare spontană Testarea FVW:PB se preferă definitivă

  42. BvW de tip 2M • Variantă modificată prin funcţia PLT-dependentefărăabsenţa multimerilor cu greutate moleculară mare • Malinterpretare, ştergeri ale structurilor mici • Anamneză clinică (personalăsau familială) hemoragie (mucosal)

  43. BvW de Tip 2M • Constatările de laborator • Numărul de PLT este normal • FvW:RCoeste scăzut • FvW:CBAeste redus • Activitatea factorului VIII este normală/ • FvW:Agde obicei este normală/  • Raportul FvW:Rco sau FvW:CBA la FvW:Ag este <0.7 • RIPA is redusă • PFA C.T. este ca regulă  • Prezenţa multimerilor cu greutate moleculară mare • Pot fi observate cantităţi mărite

  44. BvW de Tip 2N • Deficienţă calitativă ce rezultă înconjugare redusă dintre FvW:FVIII • Autosomalrecesivă • Heterozigoţi cu factor VIII normal • Hemoragia Hxlegată de intervenţie chirurgicală sau trauma

  45. BvW de Tip 2N • Constatările de laborator • Numărul de PLT e normalcu aPTT prelungit • FvW:RCoeste normal • FvW:CBAeste normal • Activitatea  factor VIII e (de obicei între 5-30 IU/ml) • Conjugare redusă dintre FvW:FVIIIC • FvW:Age normal • Raportul FvW:RCo sau FvW:CBA la FvW:Ag este >0.8 • RIPA este normală • PFA C.T. e normal • Structura multimerului este normală

  46. BvW de Tip III • Absenţă virtuală a proteineiFvW • Apariţie timpurie în timpul vieţii • Mutaţii multiple, inclusiv modificări de structură şi mutaţii lipsite de sens, precum şi ştergeri

  47. BvW de Tip III • Constatările de laborator • aPTTprelungit • Absenţa FvW:RCo • Absenţa FvW:CBA • Activitatea factorului VIII este considerabil • Absenţa FvW:Ag • RIPA estedeosebit de anormală • PFA C.T. e considerabil de anormal • Structurile de multimeri sunt nedetectabile

More Related