600 likes | 1.32k Views
Osnov e metabolizma mikroorganizama. Metaboli čki diverzitet. M etabolizam - obuhvata sve hemijske procese koji se de š avaju u ć eliji - anabolički (zahtevaju energiju) - katabolički (otpuštaju energiju) E nergij a neophodna za biosinteze, transport , k ret anje itd.
E N D
Osnovemetabolizma mikroorganizama Metabolički diverzitet
Metabolizam- obuhvata sve hemijske procese koji se dešavaju u ćeliji - anabolički (zahtevaju energiju) - katabolički (otpuštaju energiju) • Energija neophodna za biosinteze, transport, kretanje itd. • Slobodna energija – energija raspoloživa za koristan rad • ΔG0' – promena energije u toku hemijske reakcije
Konzervacija E u ćeliji uključuje oksidaciono-redukcione (redox) reakcije • Oksidacija – oduzimanje elektrona supstanci • Redukcija – dodavanje elektrona supstanci • Prenos samih elektrona ili elektrona i protona • Donore-se oksiduje a akceptor se redukuje • Redukcioni potencijal,E0'– težnja supstance da bude oksidovana ili redukovana • veća razlika u redukcionom potencijalu = više energije
Metabolički tipovi mikroorganizamaprema izvoru ugljenika • Autotrofi – dobijaju ugljenik redukcijom CO2 iz vazduha • Heterotrofi (organotrofi) – dobijaju ugljenik iz organskih jedinjenja
Metabolički tipovi mikroorganizama prema izvoru energije • Fototrofi – dobijaju energiju transformacijom svetlosne energije • Hemotrofi – dobijaju energiju oksidacijom hemijskih jedinjenja - hemoorganotrofi oksiduju organska jedinjenja - hemolitotrofi oksiduju neorganska jedinjenja
Jedinjenja sa visokom energijom • Energija dobijena u toku procesa okidoredukcije mora biti sačuvana za različite potrebe. • Energija se u živim sistemima primarno konzervira u formi fosforilisanih jedinjenja (npr. ATP) = jedinjenja bogata energijom
Jedinjenja sa visokom energijomAdenozin trifosfatATP • Energija ATP koja se može iskoristiti za biohemijske procese nalazi se u dve terminalne visoko energetske fosfatne veze.
Dugotrajno čuvanje energije • Prokariotski mikroorganizmi: - glikogen - lipid poli-β-hidroksibutirat - elementarni sumpor u granulama • Eukariotski mikroorganizmi: - skrob - jednostavne masti
Biološke oksidoredukcije i konzervacija energije Dva mehanizma konzervacije energije kod hemoorganotrofa • Fermentacija - redoks proces se odvija u odsustvu spoljnog akceptora elektrona - Fosforilacija na nivou supstrata • Respiracija, disanje - postoji spoljni akceptor elektrona - aerobna - akceptor elektrona je molekularni kiseonik - anaerobna - akceptor elektrona je neko drugo, obično neorgansko jedinjenje - Oksidativna fosforilacija
Sinteza ATP tokom fermentacijeFosforilacija na nivou supstrata • ATP se sintetiše u toku katabolizma organskog supstrata • Neorganski fosfat se vezuje za intermedijer u kataboličkom putu • Sa fosforilisanog intermedijera fosfatna grupa se prenosi na ADP • Nastaju ATP i fermentacioni produkt • Oslobađa se mala količina potencijalne energije
Sinteza ATP tokom disanjaOksidativna fosforilacija • ATP se sintetiše u toku katabolizma: - organskog supstrata (hemoorganotrofi) - neorganskog supstrata (hemolitotrofi) • Sinteza ATP na račun protonske motorne sile koja se generiše u toku prenosa elektrona kroz respiratorni lanac
Putevi razgradnje glukoze kod prokariota • Glikoliza • Heksozomonofosfatni put • Entner-Doudoroff-ov put (Pseudomonas, Rhisobium, Zymomonas, Agrobacterium)
Razgradnja glukoze u fermentacijiGlikoliza • Tri faze • - I Pripremne reakcijeprodukuju se 2 molekula ključnogintermedijera, gliceraldehid 3 fosfata • II Glikoliza • OR, produkuju se fosfatne veze bogate energijom (ATP) i formiraju se 2 piruvata • III Sinteza fermentacionog • produkta • etanol, mlečna kiselina, sirćetna kiselina.... • NADH za redukciju piruvata iz faze II • Neto: 2 ATP/1 glukoza
U toku procesa fermentacije oslobađa se malo energije: - Atomi ugljenika početnog supstrata se samo delimično oksiduju, - Razlika u redukcionim potencijalima primarnog donora elektrona i terminalnog akceptora elektrona je mala.
Oksidativna fosforilacija“Proton motive force”PMF: Hemiosmoza • Sinteza ATP vezana za “proton motive force” kroz membranu • Elektrohemijski potencijal membrane - unutrašnja strana negativna i alkalna - spoljašnja pozitivna i kisela - membrana naelektrisana i energizovana • Energija se koristiti: - transport jona - pokretanje flagela - formiranje fosfatne veze bogate energijom u ATP, enzimom ATP-sintetaza (ATP-aza )
Prenosioci elektrona u elektron-transportnom lancu • Energizovano stanje membrane (PMF) uspostavlja transport elektrona • O-R reakcije se mogu podeliti na 3 etape: - uklanjanje elektrona sa primarnog donora - transfer elektrona preko jednog ili serije prenosioca - predavanje elektrona terminalnom akceptoru • Transfer elektrona preko intermedijera prenosioca elektronauključuje seriju OR reakcija • Prenosioci elektrona se mogu podeliti na 2 klase: - slobodni - vezani (membrane-asociated)
Komponente za prenos elektronaSlobodni prenosioci NAD+(nikotinamid adenin dinukleotid) • primarno u kataboličkim procesima NADP+(NAD fosfat) - primarno u anaboličkim procesima 1.NADH dehidrogenaza(na unutrašnjoj strani membrane) - prenosi 2e- + 2H+sa NADH (nastalog u toku različitih procesa) do flavoproteina.
NAD omogućuje da hemijski različiti molekuli budu inicijalni donori elektrona
Komponente za prenos elektrona 2. Flavoproteini, sadrže derivate riboflavina (vit B2) kao čvrsto vezane koenzime • Flavin mononukleotid, FMN • Flavin adenin dinukleotid, FAD • Primaju 2e- + 2H+ali predaju samo e- FMN
Komponente za prenos elektrona 3. Fe-S proteini - sadrže gvožđe vezano za S • primaju i predaju samo e- • Najčešće konfiguracije - Fe2S2 (feredoksin) - Fe4S4
Komponente za prenos elektrona 4. Citohromi • cyt a, cyt b, cyt c, cyt d, cyt o, itd. • proteini koji sadrže hem kao prostetičnu grupu • mogu biti međusobno u kompleksu ili sa Fe-S proteinima • Primaju i predaju samo 1 e- Citohrom-Fe2+ Citohrom-Fe3+ + e-
Komponente za prenos elektrona 5. Kinoni, mali vrlo hidrofobni molekuli • rastvorljivi su u mastima, • slobodno difunduju kroz membranu • generalno prenose e- od FeS proteina do citohroma • ubikinoni (koenzim Q) • naftokinoni, derivati vit K • Kao flavoproteini primaju 2e- + 2H+ali predaju samo e-
Formiranje ATP-a ATP-sintetaza (kompleks V) • F0 – membranski ab2c12 kompleks, H+ kanal • F1 – 33γεδkompleks okrenut ka citoplazmi, katalizuje reakciju ADP + Pi → ATP • 3-4 H+ za 1 ATP • Enzim katalizuje reverzibilne reakcije između ATP i ADP + Pi • ATP-aza dopušta kontrolisani ulazak protona kroz naelektrisanu membranu
Inhibitori - blokiraju protok elektrona i ATP sintetazu: - CO sprečava redukciju O2(nastanak H2O) - cijanid (CN-), vodonik sulfid (H2S) ili azid (N3-) se vezuju za citohrome i blokiraju transport elektrona. “Uncouplers” - sprečavaju kuplovanje procesa) - dinitrofenol i dikumarol - rastvorljivi u mastima i povećavaju propustljivost membrane i prolazprotona (gubi se “PMF”). Agensi koji utiču na lanac transporta elektrona
Protok C u respiracijiCiklus trikarbonskih kiselina(CTK ciklus) • ima važnu ulogu u procesu potpune razgradnje organskih materija u toku respiracije. Neto: 8 ATP iz glikolize 30 ATP iz CTK 38 ATP/1glukoza NADH i FADH ulaze u elektron transportni lanac
RESPIRACIJA- aerobna i anaerobna AEROBNA RESPIRACIJA - krajnji akceptor elektrona kiseonik ANAEROBNA RESPIRACIJA –drugo neorganskoili organsko jedinjenje krajnji akceptor elektrona - nitrati, NO3-,, feri joni, Fe3+,sulfatiSO42-,karbonati CO32- ineke organske komponente.
Kataboličke alternativeAnaerobno disanje • Korišćenjem alternativnih akceptora elektrona mikroorganizmi mogu da respirišu i u sredinama bez kiseonika • Veliki ekološki i industrijski značaj • Generalno, bakterije sa anaerobnom respiracijom imaju transportni sistem elektrona kao i aerobni organizmi.
Anaerobno disanje • Akceptori elektrona u anaerobnoj respiraciji: - nitrati (NO3-), - feri joni (Fe3+), - sulfati (SO42-), - karbonati (CO32-) i - neke organska jedinjenja • Usled mesta ovih jedinjena u nizu elektrona (ni jedno nije elektropozitivno kao O2/H2O par), manje se energije oslobađa kada su oni krajnji akceptori elektrona.
Organski akceptori elektrona • Mnoga organska jedinjenja nastala u toku metabolizma hemoorganotrofa mogu biti akceptori elektrona.
Kataboličke alternativeHemolitotrofni (hemoautotrofni) metabolizam
Fotosinteza • Fototrofija – korišćenje svetlosti kao izvora energije • fotoautotrofi (izvor ugljenika za biosinteze - CO2) • fotoheterotrofi (izvor ugljenika za biosinteze – organska jedinjenja) • Redukujuća snaga za redukciju NAD(P)H kod različitih MO iz različitih izvora
Tipovi fotosinteze • anaerobna fotosinteza • fotosintetičke bakterije • - redukujuća snaga za redukciju NAD(P)H = redukovane forme sumpora (H2S, S0, S2O32-)ili H2
Tipovi fotosinteze • aerobna fotosinteza • cijanobakterije, alge i biljke • redukujuća snaga za redukciju NAD(P)H = H2O
Raznovrsnost fotosintetičkih pigmenata • različiti apsorpcioni spektri – strategija za bolju iskorišćenost EM spekta • ekološki značaj
Fotosintetičke membrane • Zelene biljke – hloroplasti • kod prokariota – sistem unutarćelijskih membrana 1. invaginacije citoplazmatične membrane (purpurne bakterije) 2. sama citoplazmatična membrana (heliobakterija) 3. sama citoplazmatična membrana i hlorozom (zelene bakterije) 4. tilakoidne membrane (cijanobakterije) • reakcioni centar i antenski pigmenti • pomoćni pigmenti: • karotenoidi (fotoprotektivna uloga) • fikobilini (prikupljanje svetlosti)
Hlorozom zelenih sumpornih i zelenih nesumpornih bakterija BP proteini povezuju hlorozom sa cit. membranom hlorozomi Chlorobium tepidum (zelena sumporna bakterija), strukura hlorozoma - mogu da rastu na najnižem intenzitetu svetlosti
Fotofosforilacija • treći način sinteze ATP • u toku svetle faze fotosinteze, kada svetlost generiše protonsku motornu silu • ciklična i neciklična
Ciklična fotofosforilacija kod bakterija • elektroni se kreću unutar zatvorene petlje • slično respiraciji, PMF se formira tokom protoka elektrona kroz membranu ALI • nema inputa ni outputa elektrona • redukujuća snaga (NADH) za redukciju CO2? • - purpurne – povratni tok elektrona (na račun PMF) • - zelene i heliobakterije – direktni proizvod svetlosnih reakcija, kao i ATP
Ciklična fotofosforilacija i protok elektrona kod fototrofnih bakterija BChl bakteriohlorofil, BPh bakteriofeofitin, Chl a hlorofil a
Neciklična fotofosforilacija • Cyanobacteria, alge, biljke • Kooperacija fotosistema I i II • Samo fotosistem I neke alge i bakterije koristeći neki drugi izvor redukujuće snage, ne vodu-ciklična fotofosforilacija
Bakteriorodopsin zavisna fotofosforilacija(Halobacterium salinarium) • Bakteriorodopsin strukturno i funkcionalno sličan pigmentu u oku rodopsinu. • Za bakteriorodopsin je povezan retinal (daje mu purpurnu boju), molekul sličan karotenoidu koji apsorbuje svetlosnu energiju i formira PMF. • Svetlošću stimulisana protonska pumpa • U uslovima ograničene količine O2
Autotrofna fiksacija CO2 Najrašireniji put – Kalvinov ciklus- ATP, NAD(P)H i serija enzimaAlternativni puteviObrnuti CTK - kod zelene sumporne Chlorobium- kod nekih nefototrofnih arhea i kod Aquifex- možda rašireniji nego što se pretpostavljalo- rani oblik autotrofije tokom evolucjeHidroksipropionatni put- zelena nesumporna Chloroflexus- nefototrofne hipertermofilne arhee- možda prvi pokušaj autotrofije u evoluciji
Zahvaljujući velikoj metaboličkoj raznovrsnosti mikroorganizmi igraju ključnu ulogu u recikliranju biogenih elemenata u prirodi