200 likes | 402 Views
Možnosti regenerace in vitro – zdroje explantátů. Gamety (androgeneze, gynogeneze) Embrya (embryokultury x embryogeneze) Semena (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu) Embryogeneze na zygotických embryích Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny)
E N D
Možnosti regenerace invitro – zdroje explantátů • Gamety (androgeneze, gynogeneze) • Embrya (embryokultury x embryogeneze) • Semena • (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu) • Embryogeneze na zygotických embryích • Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny) • Meristémy (apikální, axilární) • Diferencované orgány dospělých rostlin (listy, kořeny, lodyhy – nody)
postup regenerace invitroorgánové kultury Společné pro in vitro kultury • 1/ izolace explantátu (primární kultura) • 2/ proliferace, multiplikace (pasážování) • 3/ rhizogeneze • 4/ aklimace
EXPLANTÁTY Z KLÍČNÍ ROSTLINY epikotyl děloha hypokotyl Kmín (Krens,2003)
Kalus - dediferencované pletivo • ránový obrana organismu • neorganogenní (neembryogenní) produkce metabolitů, studium • organogenní (prýtykořeny) selekce,mikropropagace • embryogenní (somatické embryo SE rostlinka) selekce,mikropropagace (nebezpečí vzniku chimér)
Přímá organogeneze - (nižší riziko mutací) : • rychlé namnožení nových odrůd (podstatné zvýšení množitelského koeficientu, urychlení šlechtitelského procesu) (brambory klasicky 1: 5 -10, mikropropagace 1: 500000) • vzdálená křížení • šlechtitelsky cenné mutace • množení těžko množitelných kultur (rododendrony apod.), cenných jedinců, vzácných druhů
Přímá organogeneze Adventivní meristémy diferenciují na listech, lodyhách nebo částech květu
Nepřímá organogeneze - využití: selekce • využití přirozené somaklonální variability • selekční tlak • mutageneze • (transgenoze)
Nepřímá organogeneze na segmentech hypokotylu cukrové řepy (Jacq et al, 1992) 1/ indukce kalusu (a,c, d) 2/ regenerace prýtů (e) AUX:CK 3) zakořenění (f) bez RR nebo s IBA 4) aklimace (g)
CK: AUX v indukci procesů diferenciace a dediferenciace koncentrace cytokininu auxinu tvorba kořenů na řízcích tvorba buněčné suspenze somatická embryogeneze iniciace tvorby kalusu indukce adventivních pupenů proliferace prýtů
* V určitém časovém odstupu (pasáž) • Počet kontaminovaných/ rostoucích/nerostoucích kultur (1. Týden) • Měření přírůstku prýtů, kořenů, kalusu (*) • vážení - nárůst hmotnosti (*) • počítání regenerovaných prýtů (koeficient množení), buněk (*) • hodnocení životnosti (*) • mitotický index (*)
A to je pro dnešek konec teorie Máte k tomu nějaké dotazy?