Prošla nedelja

1. Prošla nedelja Imunoaglutinacija (princip, podela, primena) Imunoprecipitacija (princip, podela, primena)

2. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA

3. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA M M - marker At Fc Fab Fab ENZYME-LINKEDIMMUNOSORBENTASSAY (ELISA,EIA) - marker ENZIM IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA RADIOIMMUNOASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP

4. Enzimski imuno-test (EIA, ELISA) Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (najčešće u serumu) Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo) Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra) Može da bude kvalitativna ili kvantitativna Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)

5. ELISA detekcija antitela ispitivani serum antigen kojim je obložena ploča

6. ELISA detekcija antitela 12 6 Ispiranje Inkubacija

7. E E E E E E ELISA detekcija antitela obeležena sekundarna At

8. E E E E E E ELISA detekcija antitela 12 6 Inkubacija

9. E E E E E E E E ELISA detekcija antitela Ispiranje

10. E E E E 12 ELISA detekcija antitela 6 Kolorimetrijska detekcija

11. Ag ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) uzorak (serum) neobeležena Ag-specifična At

12. ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 6 Ispiranje Inkubacija

13. E E E E E ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 obeležena Ag-specifična At 6 Ispiranje Inkubacija

14. E E ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA) 12 dodavanje supstrata 6 Kolorimetrijska detekcija

16. Imunofluorescencija (IF) Koristi se za detekciju antigena (na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (najčešće u serumu) Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo) Bazira se na principu da fluorohromi kada se ozrače svetlom jedne talasne dužine bivaju pobuđeni da emituju svetlo druge talasne dužine (fluorescein – zeleno, rodamin – crveno ...) Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa ili protočnog citoflourimetra

17. Detekcija Ag DIREKTNA (DIF) (obeleženo primarno At) IMUNOFLUORESCENCIJA INDIREKTNA (IIF) (obeleženo sekundarno At)

18. F F F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA obeležena primarna At fiksirani uzorak

19. F F F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA 12 6 Ispiranje Inkubacija

20. F F DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA Ekscitacija Fluorescencija

21. DIF Chlamydia trachomatis

22. Detekcija Ag DIREKTNA (DIF) (obeleženo primarno At) IMUNOFLUORESCENCIJA Detekcija Ag INDIREKTNA (IIF) (obeleženo sekundarno At) Detekcija At

23. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija i kvantitiranje At u serumu pacijenta) ispitivani serum fiksirani antigen

24. INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) 6 Ispiranje Inkubacija

25. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) obeleženo sekundarno At Inkubacija

26. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) 12 6 Inkubacija

27. F F F F F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) Ispiranje

28. F F F F INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta) Ekscitacija Fluorescencija

29. Indirektna Imunofluorescencija ANCA (anti neutrofilna At protiv citoplazmatskih Ag) Neutrofili (pANCA) Perinuklearno vezivanje Neutrofili (cANCA) Citoplazmatsko vezivanje

30. Indirektna Imunofluorescencija (At protiv Ag glomerularne bazalne membrane) Glomerulonefritis Goodpasture’s sindrom

31. Detekcija Ag DIREKTNA (DIF) (obeleženo primarno At) specifičnost IMUNOFLUORESCENCIJA Detekcija Ag INDIREKTNA (IIF) (obeleženo sekundarno At) osetljivost Detekcija At

32. Radio-imunotest (RIA) Nobelova nagrada za fiziologiju ili medicinu 1977 "for the development of radioimmunoassays of peptide hormones" Rosalyn SussmanYalow July 19, 1921 – May 30, 2011 Vrlo osetljiv kvantitativan test Koristi se za određivanje niskih koncentracija antigena u rastvoru (npr. hormona u krvi) Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I) Meri se vezana radioaktivnost pomoću odgovarajućeg brojača Nedostatak: rad sa radioaktivnošću i odlaganje radioaktivnog otpada

33. Brzi test za otkrivanje trudnoće

34. BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (princip) Detekcija HCG u urinu trudne žene Koriste se tri vrste antitela: 1. anti-HCG antitelo - obeleženo koloidnim zlatom (slobodno) 2. anti-HCG antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu) 3. anti-imunoglobulinsko antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)

35. BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (rezultati) + uzorak (urin) pozitivan – uzorak (urin) negativan

36. Z Z Z Z Z Z Z BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (pozitivan rezultat) uzorak (urin) pozitivan uzorak (urin) neobeleženo anti-HCG At anti-Ig At + HCG difuzija difuzija obeleženo anti-HCG At Z Z Z Z

37. Z Z Z Z Z BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (negativan rezultat) negativan uzorak (urin) uzorak (urin) neobeleženo anti-HCG At anti-Ig At – difuzija difuzija obeleženo anti-HCG At Z Z Z Z

38. 1. ELISA se koristi za detekciju a. enzimom 2. Antitelo u ELISA testu obeleženo je b. kolorimetrom 3. ELISA se radi c. antigena ili antitela u tečnim uzorcima 4. Razgrađeni supstrat od strane enzima u ELISA testu detektuje se d. indirektna imunofluorescenca ili ELISA 5. U ELISA testu količina antigena ili antitela određuje se na osnovu e. jačine boje razgrađenog supstrata 6. U testu indirektne imunofluorescencije fluorescentnom bojom je obeleženo f. radioaktivni izotop 7. Za dokazivanje bakterije iz roda Chlamydia u cervikalnom brisu koristi se g. u ploči za mikrotitraciju 8. Za dokazivanje auto-antitela u serumu koristi se h. RIA i ELISA 9. U RIA testu se kao obeleživač koristi i. direktna imunofluorescencija 10. Za određivanje količine hormona u krvi koristi se j. anti-imunoglobulinsko antitelo c a g b e j i d f h

39. Sledeća nedelja Predavanje: Imunološka tolerancija: značaj i mehanizmi Autoimunost: principi i patogeneza Seminar: Reakcije preosetljivosti