1 / 45

Multisupstratni enzimi Tehnike merenja u enzimskoj kinetici

Multisupstratni enzimi Tehnike merenja u enzimskoj kinetici. Multisupstratni sistemi. 1. Neuredjeni sekvencijalni mehanizam. Kompleks EAB: ternarni ili centralni kompleks. 2. Uredjeni sekvencijalni mehanizam. A je vrlo često koenzim (NAD+).

brennan-saunders
Download Presentation

Multisupstratni enzimi Tehnike merenja u enzimskoj kinetici

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Multisupstratni enzimiTehnike merenja u enzimskoj kinetici

  2. Multisupstratni sistemi 1. Neuredjeni sekvencijalni mehanizam Kompleks EAB: ternarni ili centralni kompleks 2. Uredjeni sekvencijalni mehanizam A je vrlo često koenzim (NAD+) 3. Theorell-Chance mehanizam (ternarni kompleks se ne nagomilava) 4. Ping-pong mehanizam Transferaze

  3. Uredjeni sekvencijalni bi-bi mehanizam

  4. Koncentracija B je konstantna – rešenja kinetike sekvencijalnog uredjenog mehanizma

  5. Koncentracija A je konstantna – rešenja kinetike sekvencijalnog uredjenog mehanizma

  6. Kinetika sekvencijalnih bi-bi reakcijaLinearizacija KA – Konstanta disocijacije kompleksa EA Km(A) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu A u prisustvu zasićujućih koncentracija supstrata B Km(B) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu B u prisustvu zasićujućih koncentracija supstrata A

  7. Kinetika sekvencijalnih bi-bi reakcija

  8. Neuredjeni sekvencijalni mehanizam

  9. KA – Konstanta disocijacije binarnog kompleksa EA Km(A) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu A u prisustvu zasićujućih koncentracija supstrata B, konstanta disocijacije ternarnog kompleksa Km(B) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu B u prisustvu zasićujućih koncentracija supstrata A, konstanta disocijacije ternarnog kompleksa

  10. Koncentracija A je konstantna – rešenja kinetike sekvencijalnog neuredjenog mehanizma

  11. Koncentracija B je konstantna – rešenja kinetike sekvencijalnog neuredjenog mehanizma

  12. Ping-pong reakcije

  13. Konstantna konc. B- Konstantna koncentacija A

  14. Kinetika ping-pong bi-bi reakcija Km(A) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu A Km(B) – Mihaelisova konstanta enzima ka supstratu B

  15. Karakteristični LB plot ping-pong kinetike. Sekundarni grafik LB metode linearizacije za ping-pong rekacije. Fosfoglicerat mutaza (transfer fosforil grupe) Acetil-koenzim A:arilamin acetiltransferaza (transfer acil grupe uz formiranje aciltioenzima)

  16. Odredjivanje konstanti disocijacije za protein-ligand interakcije Ekvilibrijumska dijaliza Neekvilibrijumska dijaliza se koristi za brza odredjivanja, pri čemu se odredjuje brzina difuzije kroz polupropustljivu membranu

  17. Ekvilibrijumska gel filtracija Primenljiva i za enzime

  18. Ultracentrifugiranje Filter testovi Spektroskopske metode Mikrokalorimetrija

  19. Stehiometrijska titracija

  20. Surface Plasmon Resonance BiosensorOdredjivanje konstanti disocijacije

  21. Merenja individualnih konstanti brzina

  22. Merenja individualnih konstanti brzina Metoda stalnog protoka Vrednosti za kcat su u opsegu 1 – 107 s-1

  23. Metoda zaustavljenog protoka

  24. Metoda zaustavljenog protoka

  25. Metoda prekinutog protoka

  26. Tehnika prekinutog protoka

  27. Tehnika pulsnog prekinutog protoka

  28. Flash fotoliza Odgovorajući supstrati često nisu dostupni Za enzime koji zahtevaju ATP i GTP razvijen je supstrat tzv. “caged” ATP, odnosno GTP Time scale reda ms

  29. Relaksacione metodeTemperature jump

  30. Konstante brzina enzimskih reakcija i procesi koji odredjuju brzinu

  31. Enzimi koji postižu katalitičku perfekciju

More Related