Evaluarea biologică a pacientului alergic

1. Universitatea de Medicină și Farmacie “Victor Babeș” Timișoara Disciplina IMUNOLOGIE - ALERGOLOGIE Evaluarea biologică a pacientului alergic 2013

2. Metode de evaluare in vitro • Hipersensibilitatea de tip imediat • Determinarea IgE serice • Determinarea triptazei serice • Testul de degranulare a bazofilelor • Hipersensibilitatea de tip întârziat • Testul de transformare limfoblastică L. C.

3. Metode de evaluare in vitro • Hipersensibilitatea de tip imediat • Determinarea IgE serice • Determinarea triptazei serice • Testul de degranulare a bazofilelor • Hipersensibilitatea de tip întârziat • Testul de transformare limfoblastică L. C.

4. IgE serice • dozarea lor din sânge prezintă: • Sensibilitate - 89% • Specificitate - 91% • niveluri ↓ de IgE totale → probabilitate redusă de boală clinică • niveluri ↑ de IgE specifice la un alergen → corelație bună cu afecțiunea clinică • reprezintă sub 0,001% din totalul Ig serice = 0,1-0,4 μg/ml • nivel seric foarte ↓ → pot fi puse în evidență doar prin metode radio-imunologice sau imuno-enzimatice • timp de înjumătățire – 3 zile • concentrația serică ↑ → boli alergice și parazitare • IgE serice totale • IgE serice specifice Măsurarea IgE circulante oferă o evaluare obiectivă a prezenței sensibilizării la un alergen. L. C.

5. IgE serice • IgE serice specifice • cantitatea de IgE alergen-specifice prezente în sânge • apar în urma sensibilizării la un alergen specific → evaluare obiectivă a sensibilizării la un anumit alergen • IgE serice totale • cantitatea totală de IgE circulante din sânge • apar în urma sensibilizării la alergeni • utile în diagnosticarea bolilor alergice IgE-mediate • concentrație sericădependentăde vârstă → ↑ în copilărie → valorile atinse în jurul vârstei de 10 ani tind să se mențină și în viața adultă L. C.

6. IgE – Valoarea clinică IgEsericetotale • valori crescutedoar la 30-40% dintrepacienții cu rinităalergică IgE serice specifice • valoare diagnostică similară cu pricktest-ul • paradoxal – sensibilitate mai micădecât testelecutanate • se utilizează în locul pricktest-ului în următoarele situații: • lipsa extractelor standardizate pentru alergenul suspicionat • pozitivarea controlului negativ • imposibilitate întreruperii terapiei antihistaminice • prezența de leziuni cutanate generalizate Un test NEGATIV nu exclude existența unei sensibilizări alergice L. C.

7. IgE – Valoarea clinică • Identificarea alergenilor implicați • Elaborarea unor sfaturi individualizate → reducerea expunerii la alergeni • Optimizareaplanurilor terapeutice individuale (doză, durată, step up/down) • Stabilirea indicației de imunoterapie specifică • Aprecierea dezvoltării toleranței imune (alergii alimentare, imunoterapie specifică) • Evaluează stadiul de SENSIBILIZARE prin detectarea timpurie a nivelurilor ↑ de IgE, înaintea dezvoltării tabloului clinic • Oferă suport în explicația progresieiafecțiunilor alergice →“MARȘUL ALERGIC” • Stabilește SENSIBILIZAREA SPECIFICĂ LA ALERGENII implicați în dezvoltarea simptomelor alergice • Oferă o orientare clară în stabilirea MANAGEMENTULUI BOLII L. C.

8. IgE – Valoarea clinică Identificarea pacienților cu risc de: • Marș alergic • Exacerbare • Cronicizare Simptome cutanate → Simptome respiratori Simptome ușoare → Simptome severe Simptome recurente → Simptome persistente • trecerea progresiva de la o manifestare alergica la alta intr-o anumita perioada de timp

9. IgE L. C.

10. Metode de evaluare in vitro • Hipersensibilitatea de tip imediat • Determinarea IgE serice • Determinarea triptazei serice • Testul de degranulare a bazofilelor • Hipersensibilitatea de tip întârziat • Testul de transformare limfoblastică L. C.

11. Triptaza serică • principala componentă proteică conținută în granulațiile mastocitare • principala sursă de triptază – mastocitele activate în urma unei reacții de hipersensibilitate de tip I • două forme de triptază serică: • α-triptaza - secretată de către toate mastocitele - reflectă numărul total de mastocite - ↑ în mastocitoza sistemică • β-triptaza matură - secretată doar de către mastocitele activate - se corelează cu activarea mastocitară - ↑ în anafilaxie • majoritatea laboratoarelor determină triptaza totală (α + β) L. C.

12. Triptaza serică • nivelul seric de triptază • atinge un vârf la 30-60 min. de la debutul reacției anafilactice • timp de înjumătățire ≈ 2 h • valorile se mențin crescute 4-6 h VN triptaza totală: < 11,4 ng/ml β-triptaza matură: < 1 ng/ml VP: triptaza totală >11,4 ng/ml β-triptaza matură > 2 ng/ml triptaza totală > 20 ng/l → se asociază cu mastocitoză sistemică •  Momentul optim de recoltare este la 30 min. – 3 h de la debut →se asociază cu anafilaxie L. C.

13. Metode de evaluare in vitro • Hipersensibilitatea de tip imediat • Determinarea IgE serice • Determinarea triptazei serice • Testul de degranulare a bazofilelor • Hipersensibilitatea de tip întârziat • Testul de transformare limfoblastică L. C.

14. Testul de degranulare a bazofilelor Bazofilele dețin alături de mastocite un rol esențial în răspunsul imun alergic de tip imediat. • evaluarea in vitro a activării bazofilelor în urma contactului cu un alergen: INDICAȚII Evaluarea reacțiilor alergice de tip imediat în cazurile în care istoricul bolii, prick-testul și determinarea nivelului seric de IgE nu sunt suficient de sugestive pentru conturarea unui diagnostic. • Reacții IgE-mediate • Reacții nonIgE-mediate (pseudo-alergii → degranulare celulară produsă în mod direct) • veninuri de insecte • medicamente • acarieni, scuame de animale • latex, formaldehidă și alte substanțe chimice • alimente • materiale dentare și alți alergeni profesionali L. C.

15. Testul de degranulare a bazofilelor AVANTAJE • Metodă rapidă de diagnostic (1 h) • Nu prezintă riscuri pentru pacient • Test funcțional ce reproduce răspunsul imun in vitro • Sensibilitate bună • Specificitate ↑ • Nu necesită întreruperea tratamentului antihistaminic DEZAVANTAJE • Necesită celule viabile neactivate • Necesită aparatură performantă L. C.

16. Testul de degranulare a bazofilelor TEHNICĂ Izolarea bazofilelor din sângele recoltat Stimularea cu extract alergenic Evaluarea flow-citometrică a expresiei CD63 INTERPRETARE Test POZITIV Creșterea expresiei CD63 > 10% comparativ cu martorul negativ (activare spontană a bazofilelor) Obs. Un test NEGATIV nu exclude existența unei reacții de hipersensibilitate de tip imediat L. C.

17. Metode de evaluare in vitro • Hipersensibilitatea de tip imediat • Determinarea IgE serice • Determinarea triptazei serice • Testul de degranulare a bazofilelor • Hipersensibilitatea de tip întârziat • Testul de transformare limfoblastică L. C.

18. Testul de transformare limfoblastică (LTT) • singura metodă de evaluare in vitro a hipersensibilității de tip IV PRINCIPIU Limfocitele sensibilizate anterior față de un anumit Ag proliferează și se transformă în blaști la o nouă expunere la același Ag  INDICAȚII • Evaluarea hipersensibilității de tip IV la medicamente, metale, materiale dentare, alimente • Evaluarea unor defecte sau tulburări funcționale ale imunității celulare • Evaluarea reactivității limfocitare față de anumiți agenți infecțioși  Momentuloptim de efectuare LTT - 10 zile → 6 săptămâni de la episodulalergic L. C.

19. Testul de transformare limfoblastică (LTT) AVANTAJE • Nu prezintă riscuri pentru pacient • Relevanță mai mare comparativ cu patch testul • Nu necesită întreruperea tratamentului antihistaminic DEZAVANTAJE • Metodă costisitoare de diagnostic • Sensibilitate ↓ – 60-70% • Specificitate - 85% • Testul nu este standardizat pentru orice alergen și necesită experiență • Necesită - control pozitiv – excluderea toxicității induse de medicamente - control negativ – excluderea activării non-specifice L. C.

20. Testul de transformare limfoblastică (LTT) L. C.

21. Testul de transformare limfoblastică (LTT) TEHNICĂ • Izolarea limfocitelor din sângele venos periferic • Resuspendarea celulelor în mediu de cultură specific • Stimularea limfocitelor cu extracte alergenice • Adăugarea în ziua 6 de cultură de timidină marcată cu 3H, care se va încorpora în celulele-fiică ale limfocitelor activate (în urma replicării ADN) • Cuantificarea sintezei noi de ADN induse de alergen prin măsurarea ratei de incorporare a 3H-timidinei → direct proporțională cu rata de proliferare limfocitară Pe baza ratei de incorporare a a 3H-timidinei se calculează indexul de stimulare (SI) SI = radioactivitatea încorporatăîn culturile cu antigen radioactivitatea încorporatăîn culturile fără alergen L. C.

22. Testul de transformare limfoblastică (LTT) INTERPRETARE Test NEGATIV SI < 2 → nu există sensibilizare de tip IV față de alergenul testat Test POZITIV 2 < SI < 3 → intens sugestiv pentru o reacție pozitivă SI > 3→ rezultat net pozitiv Test NECONCLUDENT Nu s-au întrunit criteriile de validare a testului: • Invalidare controlului pozitiv (lipsa de activare policlonală a limfocitelor) • Invalidarea controlului negativ (proliferare spontană crescută) Obs. Un test NEGATIV nu exclude existența unei reacții de hipersensibilitate mediată celular L. C.

23. Eozinofilele →eozinofilie VN: 1-4 % < 350/mm3 Creșterea numărului de eozinofile > 4% > 500/mm3 • Afecțiuni alergice • Parazitoze • Neoplazii • Boli inflamatorii autoimune > 1500/mm3→sindromhipereozinofilic L. C.

24. Activitatea diaminoxidazei (DAO) • Intoleranța la histamină – consecința dezechilibrului dintre cantitatea de histamină acumulată în organism și capacitatea de degradare a acesteia de către enzima DAO • Deficitul DAO este dobândit: • afecțiuni gastrointestinale care ↓ producția sa • inhibarea activității enzimatice prin consum de alcool, medicamente • NU este o afecțiune IgE-mediată → testarea cutanată și IgE serice specifice NEGATIVE • alimente cunoscute a conţine un nivel ridicat de histamină - supuse fermentaţiei microbiene în cadrul procesului de fabricație histidină (aa conținut în toate proteinele) → histamină • alimente care stimulează eliberarea de histamină în mod fiziologic : albuș de ou nefiert, crustacee, peşte, ciocolată, căpşuni, roşii, ananas, alcool L. C.

25. Activitatea diaminoxidazei (DAO) Indicații: Pacienți cu suspiciune clinică de intoleranță la histamina (prezența a ≥ 2 simptome tipice cu răspuns favorabil la dieta fără alimente cu conținut ↑ în histamină) VN: 14-33 UI/ml INTERPRETARE • activitatea DAO ↓ → capacitate enzimatică ↓ de degradare a histaminei • activitatea DAO ↑ → proces alergic activ L. C.