1 / 12

Untersuchungen zur Funktion des P38IP-Gens bei Prostatakarzinomzelllinien Ergebnisse PC-3

Untersuchungen zur Funktion des P38IP-Gens bei Prostatakarzinomzelllinien Ergebnisse PC-3. Doreen Kunze 03.05.05. Zeitabhängigkeit (Ernte 12-72 h nach TF-Start) Konzentrationsabhängigkeit (50-1000 nM) Bestimmung der Apoptoserate Zellzyklusmessung WST-Test (siRNA-D3 und D5)

daria-castaneda
Download Presentation

Untersuchungen zur Funktion des P38IP-Gens bei Prostatakarzinomzelllinien Ergebnisse PC-3

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Untersuchungen zur Funktion des P38IP-Gens bei ProstatakarzinomzelllinienErgebnisse PC-3 Doreen Kunze 03.05.05

  2. Zeitabhängigkeit (Ernte 12-72 h nach TF-Start) Konzentrationsabhängigkeit (50-1000 nM) Bestimmung der Apoptoserate Zellzyklusmessung WST-Test (siRNA-D3 und D5) Zellkoloniebildungstest Gliederung

  3. Zelllinie: PC-3 Transfektionsbedingungen: Konzentration siRNA: 250 nM siRNA : DOTAP = 1 : 4 TF-Zeit: 4 h Ernte nach 12, 24, 48 und 72 h RNA-Isolierung, cDNA-Synthese quantitative RT-PCR 1. Zeitabhängigkeit

  4. siRNA-Konstrukte: Sekundärstrukturvorhersage: D1 (2245-2263 bp) 10x10 D2 (2215-2233 bp) 13x10 D3 (1024-1042 bp) 1x10 1x9 D4 (440-458 bp) 9x10 1x9 D5 (1288-1306 bp) 2x10 3x9 axb: a – Anzahl der Nukleotide im Konstrukt die b erfüllen b – WSK, dass Nukleotid in 10 vorhergesagten Sekundärstrukturen einzelsträngig ist ( 10 = 100 % ) 1. Zeitabhängigkeit

  5. Ergebnisse: Inhibierung der P38IP-mRNA-Expression (relativ zu PBGD), normiert auf ns-siRNA 1. Zeitabhängigkeit

  6. Ergebnisse: Inhibierung der P38IP-mRNA-Expression (relativ zu PBGD), normiert auf ns-siRNA 2. Konzentrationsabhängigkeit

  7. TF mit siRNA-D5 (125 nM) keine signifikanten Unterschiede !!! Apoptosemessung 24, 48 und 72 h nach TF-Start 5,5 % 4,9 % 4,3 % siRNA-D5 48 h ns-siRNA 48 h unbehandelt 48 h 3. Bestimmung der Apoptoserate

  8. TF mit siRNA-D5 (250 nM) bei siRNA-D5 waren seltsamer Weise viele Zellen gestorben !!! Apoptosemessung 24, 48 und 72 h nach TF-Start 3. Bestimmung der Apoptoserate siRNA-D5 48 h ns-siRNA 48 h unbehandelt 48 h

  9. TF mit siRNA-D5 (125 nM) Zellzyklusmessung 24, 48 und 72 h nach TF-Start 4. Zellzyklusmessung

  10. TF mit siRNA-D5 (250 nM) NICHT !! Zellzyklusmessung 24, 48 und 72 h nach TF-Start 4. Zellzyklusmessung

  11. 5. WST-Test siRNA-D3 und D5 - Transfektion der PC-3-PCa-Zellen mit siRNA-D3 und D5 (125 und 250 nM)

  12. 6. Zellkoloniebildungstest - Transfektion der PC-3-PCa-Zellen mit siRNA-D5 (125 und 250 nM)

More Related