220 likes | 582 Views
Den histotekniska processen. Bild från Helander KG. Från patient till mikroskop . FoU rapport 24. Lund: Studentlitteratur, 1987 Morfologisk cellbiologi, 6 hp , vt 2014 Biomedicinska analytikerprogrammet, inriktning laboratoriemedicin Cecilia Ottosson
E N D
Den histotekniska processen Bild från Helander KG. Från patient till mikroskop. FoU rapport 24. Lund: Studentlitteratur, 1987 Morfologisk cellbiologi, 6 hp, vt 2014 Biomedicinska analytikerprogrammet, inriktning laboratoriemedicin Cecilia Ottosson Kapitel 1-5 i CellularPathology
Den histotekniska processen • Mål: framställa preparat för mikroskopisk undersökning • Prov: biopsier, px kirurgisk utskärning obduktioner • PAD - patologisk-anatomisk diagnostik • Krav: god morfologi hög specificitet snabbhet
Fixering • Förhindra autolys • Förhindra bakteriell påverkan • Stabilisera vävnaden – skall inte ändra storlek eller form • Vävnaden skall kunna färgas • Vävnaden skall vara så likt det levande stadiet som möjligt • Vara ofarlig, lätthanterlig, prisvärd
Fixering • Fysikalisk fixering • Kemisk fixering • Tid • Immersionsfixering • Perfusionsfixering
Fixering • Formaldehyd - rutin
Fixering • Formaldehyd - R - CH2 – R -
Fixering • Glutaraldehyd - elektronmikroskopi - ej till – enzymhistokemi immunohistokemi vissaspecialfärgningar
Fixering • Kvicksilverklorid • Osmiumtetroxid • Ättiksyra • Alkoholer
Fixering • Sammansatta fixeringsmedel - ex Zenkersfixeringsmedel - kvicksilverklorid (fixerarcytoplasmankrympervävnaden) - ättiksyra (orsakarsvällning) - kaliumdikromat (oxidationsmedel – fixerar fetter)
Fixering • Faktorer som påverkar fixeringen - pH - temperatur - volym - vävnadens storlek och täthet (densitet)
Utskärning • Makroskopisk bedömning • Utskärning • Radikalitet - restriktionssnitt
Dehydrering och klarning • Dehydrering • Klarning
Inbäddning • Paraffin • Orientering Bilder från Prophet E. LaboratoryMethods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992
Snittning • Mikrotomer • Knivar • Vinkel • 3–5 m
Snittning • Problem vid snittning Bilder från Prophet E. LaboratoryMethods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992
Färgning • Avparaffinering och rehydrering • Kärnfärgning • Kontrastfärgning • Dehydrering och montering • Översiktsfärgning • Specialfärgning
Artefakter • Fixeringsartefakter • Förlust av material • Tillförsel av material • Mekaniska artefakter
Urkalkning • Hydroxyapatit • Syror • Kelatbildare • Faktorer som påverkar • Närärurkalkningenfärdig?
Plastinbäddning • Hårt material • Tunna snitt • Elektronmikroskopi • Akrylplaster • Epoxyplaster
Fryssnittning • Snabba svar (15-30 min) • Material som förstörs • Is –inbäddningsmedel • Snabbnedfrysning • Kryostat(ca -20°C) • Fixeringeftersnittningvid snabbasvar!
Storsnittning • ”Stora” preparat