Poruchy krvetvorby a krve Seminář

1. Poruchy krvetvorby a krve Seminář Karel Šulc, Pavel Klener Ústav patologické fyziologie1. LF UK Obrázky krevních buněk a jejich změn k doplnění textu naleznete např. na této webové stránce: - neoficiální verze pro studenty

2. Hemoglobin Určení v objemové jednotce krve, tj. v erytrocytech i v plazmě. Normální hodnotyženy: 125 – 155 g / 1 litr 12,5 – 15,5 g / 100 mlmuži: 135 – 175 g / 1 litr 13,5 – 17,5 g / 100 ml Zvýšení: polycytémie, dehydratace Snížení: anemie, hyperhydratace - neoficiální verze pro studenty

3. Počet erytrocytů udáván v množství x 1012/1 litr nebo x 109/1 ml nebox 106 / 1 μl Normální hodnotyženy: 3,8 – 5,2 x 1012 / 1 litr muži: 4,2 – 5,8 x 1012 / 1 litr Snížení: anemie, expanze ECT Zvýšení: polycytémie, dehydratace - neoficiální verze pro studenty

4. Hematokrit HTK udává procentuelnízastoupení formovaných krev-ních elementů v objemové jednotce krve Normální hodnotyženy: 0,35 – 0,46 35 - 46 % muži: 0,38 – 0,49 38 – 49 %po narození: až 0,60 pak pokles, na počátku puberty0,39, na konci puberty návrat k normálním hodnotám Snížení: anemie, expanze ECT Zvýšení: polycytémie, dehydratace - neoficiální verze pro studenty

5. MCV – střední objem erytrocytu Normální hodnota = 87,5 fl (80-96fl) MCV je změněn u různých anomálií erytrocytů (srpkovitáanemie, poikilocytóza, anisocytóza a další). Je využívánk rozlišení normo-, mikro- a makrocytárních anemií Výpočet: hematokrit x 103 / počet ery ( x 1012/ 1 litr) Pozn.: téměř vždy je MCV určen analyzátorem - neoficiální verze pro studenty

6. MCH - obsah hemoglobinu v 1 erytrocytu Norma: 29 pg (28-33pg), 18 fmol zvýšení: makrocytární anemie, snížení: mikrocytární anemie Výpočet: MCH=Hb (v g / 100 ml krve) / ery (x 1012 / 1 litr) - neoficiální verze pro studenty

7. MCHC = střední koncentrace Hb v erytrocytech Norma = 34 +- 2 % zvýšení: hereditární sférocytózanorma až mírné snížení: makrocytární anemiesnížení: mikrocytární anemie Výpočet: MCHC = Hb (v g /100 ml krve)x 100 / hematokrit - neoficiální verze pro studenty

8. Počet retikulocytů • je udáván v % všech buněk červené řady v krvi. • Norma: ženy i muži 0,5 – 1,5 % • při intravitálním barvení (brilantkresylová modř) je podílRTC stanoven z nátěru • stanovením průtokovou cytometrií jsou udány absolutníhodnoty • Zvýšení: krvácení, hemolýza (kompenzační činnost dřeně) • Snížení až vymizení: útlumerytropoézy, útlum dřeně - neoficiální verze pro studenty

9. Vyšetření kostní dřeně Sternální punkce: z manubria sterni aspirace dřeňové krve umožňuje pouze provést cytologický rozbor (např. cytogenetika, FACS, molekulární biologie) Trepanobiopsie: ze spina iliaca superior posterior: umožňuje kromě aspirace dřeňové krve též získat vzorek kostní tkáně- nezbytné pro provedení histologického rozboru kostní tkáně - neoficiální verze pro studenty

10. Vyšetření kostní dřeně: hodnocení • normo-, hypo-, hypercelularita, dysplazie kostní dřeně • množství blastů, normálních a patologických sideroblastů • rozlišení normálních a leukemických blastů (průkazenzymatických aktivit, chromozomových změn, membrá-nových diferenciačních znaků, onkogenů a další) - neoficiální verze pro studenty

11. Stanovení erytropoetinu Určení: metodou ELISA nebo RIA v séru nebo v plazmě Snížená hladina (produkce): onemocnění ledvin, anemiez nedostatku erytropoetinu, karence proteinů, zvýšení paO2, polycythaemia vera Zvýšená hladina (produkce): sekundární polycytémie,snížení paO2, sideropenické a některé hemolytické anemie - neoficiální verze pro studenty

12. Železo I. Volné železo je pro organismus toxické. V přítomnosti vol-ného Fe vznikají volné kyslíkové radikály. Pokud vznik volných radikálů přestane být řízen, vzniká oxidativní stres. Obsah železa v těle = 50 – 70 mmolů, tj. 3 – 4 g. Hemoglobin obsahuje 65 – 75 % Fe, myoglobin 3 – 5 %, enzymy s hemovou skupinou 0,2 %. V plazmě je 0,1 % vá-zaného na transferin, ve feritinu a hemosiderinu je 15 – 20 %železa. - neoficiální verze pro studenty

13. Železo II. Resorpce: duodenum, horní část tenkého střeva. Denní resorpce:asi 18 μmolů Fe (1 mg), jsou tak uhrazeny denní ztráty. Výdej: není regulován. Resorpce závisí na 1) erytropoetické aktivitě kostní dřeně, 2) na stavuželeza v zásobárnáchZtráty závisejí na obsahu feritinu v deskvamovaných buňkách. Jakmile je železo resorbováno, stane se součástí uzavřeného systémuplazma – kostní dřeň – erytrocyty – zásobárny. Zásobní železo je uloženo ve formě feritinu a hemosiderinu - neoficiální verze pro studenty

14. Stanovení Fe v séru Tranzitní pool Fe je stanovován jako sérové železo (veškeré železo je vázáno na transferin) a jako TIBC (celková vazebná kapacita železa). Norma: novorozenci 17,90 – 44,75 μmol / 1 litrděti 8,95 – 21,48 μmol / 1 litrženy 7,16 – 26,85 μmol / 1 litrmuži 8,95 – 28,64 μmol / 1 litr - neoficiální verze pro studenty

15. TIBC (celková vazebná kapacita železa) Norma: 44,75 – 71,60 μmol / 1 litr Zvýšené hodnoty TIBC jsou při sníženém Fe v séru (více neobsazeného transferinu). - neoficiální verze pro studenty

16. % saturace trasferinu(někdy se udává jako % saturace Fe) Výpočet:hladina sérového železa : TIBC Norma:20 – 55 % Sníženéhodnoty při deficitu Fe. Snížení saturace transferinu spolu s nízkými hodnotami TIBC: hemochromatóza, hemosideróza, onem. jater - neoficiální verze pro studenty

17. Feritin v séru Hodnota slouží k posouzení stavu zásob železa v organismu. Norma: μg / 1 litr nebo ng / mlnovorozenec 25 – 2001. měsíc 200 – 6006. měsíc – 15 let 7 – 140ženy 12 – 150muži 15 – 150 Snížení: lze detekovat již v počátečních stadiích sideropenické anemie Zvýšení: u anémií chronických chorob či nádorů - neoficiální verze pro studenty

18. Sérový (solubilní) transferinový receptor (sTfR Hladina je stanovovována pomocí ELISA nebo firemníchkitů. Zvýšení: deficit železa, intenzivní erytropoéza (hemolytické anemie, β-thalasemie, polycytémie) = zvýšená exprese TfR na buněčných membránách Snížení: útlum kostní dřeně, chronické selhání ledvin Pozn.: sTfR vzniká proteolýzou TfR na specifickém místě extracelulár- ní domény, vznikne monomer detekovatelný v plazmě nebo v séru. Mezi TfR a sTfR je konstantní vztah, sTfR je nepřímým ukazatelem exprese TfR v organismu. - neoficiální verze pro studenty

19. Počet leukocytů Udává se v množství x 109 / 1 litr; x 106 / ml; x 103 / μl Leukocytóza Fyziologická: zvýšená tělesná námaha, gravidita, novoro- zenci Ostatní příčiny: akutní infekce, nekróza tkáně, krvácení, zvýšená produkce ACTH a glukokortikoidů (i po podání), leukemoidní reakce, stres, intoxikace Leukopenie odsun zejm. granulocytů do okrajové hotovosti, inefektivní granulopoéza, hypersplenismus, protilátky proti leukocytům, útlum kostní dřeně - neoficiální verze pro studenty

20. Rozpočet bílých krvinek (diferenciální krevní obraz) Zjišťuje se zastoupení buněk bílé řady (PMNC i MNC) v nátěru. Granulocytóza - neutrofilní granulocyty Eozinofilie – zejm. u alergických stavů, při onemocnění pojiva („kolagenózy“), u kožních onemocnění (pemphigus vulgaris, dermatitis exfoliativa), u parazitárních onemocnění Eozinopenie – zvýšená produkceACTH a glukokortikoidů, začátek těžkých infekcí Bazofilie – při CML, Hodgkinově nemoci, pravé polycyté- mii, diabetes, hypertyreóza Bazopenie – zvýšená produkce ACTH a glukokortikoidů - neoficiální verze pro studenty

21. Lymfocytóza zejm. virové infekce infekční mononukleóza inf. cytomegalovirové ALL, CLL Lymfopenie zvýšení ACTH ozáření cytostatika lymfangiektazie v GIT drenáž dct. thoracicus (porušení stěny nádorem) Změny množství lymfocytů - neoficiální verze pro studenty

22. Stanovení některých enzymatických aktivit I. Alkalická fosfatáza (ALP) normální (nízká)aktivita - v normálních blastech a granulo-cytech zvýšená aktivita – stres, zvýšení glukokortikoidů, gravidita,polycythaemia vera snížená až nulováaktivita – CML, PNH, MDS - neoficiální verze pro studenty

23. Stanovení některých enzymatických aktivit II. Kyselá fosfatáza nulová aktivita – normální blasty nízká aktivita – AML, CLL zvýšená aktivita – CML Peroxidázová aktivita nulové hodnoty – normální blasty zvýšené až vysoké hodnoty – MDS, AML - neoficiální verze pro studenty

24. Stanovení některých enzymatických aktivit III. Aktivita nespecifických esteráz charakteristická pro monocyty (umožnění přesnější diagnostiky leukemií s monocytárnímirysy) nulová aktivita = monocytoblasty - neoficiální verze pro studenty

25. Průtoková cytometrie (flow cytometry) a FACS Průtoková cytometrie – technika umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzo-vat částice – buňky – v suspenzi. Pomocí definovaných parametrů dovolujecíleně separovat buňky na základě jejich fyzikálních a chemických vlastností (např.obsahu DNA, množství granul, pH ICT apod.) a po obsazení povrchu buněk mono-klonální protilátkou studium povrchových molekul diferenciačních antigenů, intra-celulárních molekul včetně cytokinů apod. FACS (Fluorescence-activated-cell-sorting) je jednou ze základních aplikací průto-kové cytometrie umožňující třídění buněčné suspenze do dvou i více frakcí. Tříděníje založeno na odlišném rozptylu světla a fluorescenční charakteristice jednotlivébuňky v suspenzi. Užití v hematologii:Průtoková cytometrie umožňuje provádět analýzu vybrané buněčné populace např.určení membránových diferenciačních znaků, expresi leukocytárních markerů vprůběhu hematopoetické diferenciace, imunofenotypizaci při myeloproliferativníchonemocněních, analýzu DNA apod. - neoficiální verze pro studenty

26. - neoficiální verze pro studenty

27. Průtoková cytometrie - FACS Rozdělení buněčných populacípomocí FACS - neoficiální verze pro studenty

28. Některé membránové diferenciační znaky • CD3 – T-lymfocyty, TCR (T-cell receptor) • CD4– pomocné T-lymfocyty • CD7 – T-lymfocyty, NK buňky • CD8 – cytotoxické/supresorové T-lymfocyty, NK buňky, thymocyty • CD21, CD22 – prekursory a zralé B-lymfocyty • CD34– prekursory krvetvorných buněk • CD50 – granulocyty • CD52 – eozinofilní granulocyty • CD61 – trombocyty, megakaryocyty • CD70 – Reedové-Sternbergovy buňky, aktivované B- a T-lymfocyty • CD77 – buňky Burkittovalymfomu, aktivované B-lymfocyty - neoficiální verze pro studenty