1 / 17

KINETIKA ENZIM

KINETIKA ENZIM. Dasar Teori. Penting untuk : Memahami fungsi katalitik Memahami fenomena biologik , pengaruh suhu , pH dll . Pros e dur pemurnian enzim. Subtrat berinteraksi dengan enzim. Mol substrat relaksasi. + Konformasi perubahan. Sisi aktif. Dorongan penempatan pa enzim.

jayden
Download Presentation

KINETIKA ENZIM

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. KINETIKA ENZIM

  2. Dasar Teori Pentinguntuk : • Memahamifungsikatalitik • Memahamifenomenabiologik, pengaruhsuhu, pH dll. • Prosedurpemurnianenzim

  3. Subtrat berinteraksi dengan enzim Mol substrat relaksasi + Konformasi perubahan Sisi aktif Dorongan penempatan pa enzim Mol-enzim relaks Mol-enzim dalam keadaan aktif • Perubahan konformasi Sisiaktifbeberapaenzimmengandunggugusfungsionalresiduasamamino (berpartisipasidalamproseskatalitiksebagaipemberiataupenerimaproton) • Gugus-SH dimilikiolehsistein • Gugusimidazoleolehhistidin

  4. Faktor2 yang mempengaruhi aktivitas enzim 1) Pengaruh Suhu

  5. 2) Pengaruh pH • Pepsin • pH optimum 1,6 2) Glukosa 6 fosfatase pH optimum 7,8

  6. 3) Pengaruh jumlah substrat

  7. Pengukuranaktivitasenzim: Berdasarpadaaktivitasnya. 1 IU, micromol P/menit Padaenzimtertentu : 1 IU, perobahankepekatanpada 340nm sebesar 0,001 per menit Kecepatan reaksi : jumlah substrat yg diubah per satuan waktu jumlah produk yg terbentuk per satuan waktu

  8. Pengaruh konsentrasi substrat terhadap aktivitas enzim tripsin Prosedur : 1. Panaskan larutan 1% kasein dalam bufer fosfat pH 8.0 sebanyak 30,0 ml, selama 5 menit, pada 380C. 2. Tambahkan bufer fosfat dan larutan enzim dalam bufer fosfat pH 8,0 sesuai daftar dan diaduk rata dan di inkubasikan (setelah penambahan enzim selama 20 menit. 3. Siapkan seperti pd tabel :

  9. Y B x A 4. Inkubasi pada suhu 380C selama 20 ‘ (T 20’) • Tambah TCA 3 ml • Campuran disentrifugasi 10’ (2000 rpm) • Supernatan + 1 mL Follin Ciocalteu + 4 ml 0,5 NaOH. • Diamkan 10‘ • Bacaabsorbansinya pada 650 nm. T 0 : Penambahan TCA dankaseindibalik : TCA ditambahkansebeluminkubasi & kaseinditambahkansetelahinkubasi Tugas : Tentukan aktivitas enzim dengan rumus : Absorbansi T20 – Absorbansi T 0 Aktivitas Enzim (v) = --------------------------------------------------- Waktu inkubasi

  10. Data untukmembuatpersamaan LR 2) Buat LR, hitung Km & Vmaks y B X A Kadar kaseinmL : dikonversike % denganrumus V1. N1 = V2. N2

  11. PersamaanMichaelis-Menten & Grafiknya Kebalikannya : Grafik mula-mula : [S] vs V0

  12. Pengaruh Lama Waktu Inkubasi terhadap aktivitas enzim tripsin • Dasar Metode : • Asam amino bersifat zwiter ion, titrasi ditambahkan formalin untuk mengikat –NH2 (dihasilkan senyawa dimetiol) sehingga asam amino berkelakuan penuh sebagai asam dan dapat dititrasi secara alkalimetri.

  13. Prosedur :

  14. Hitung % nitrogen asam amino dengan rumus : • Buat kurva hubungan lama waktu inkubas vs % nitrogen • asam amino (Vt – Vo) NaOH x 2, 8 % Nitrogen AA = ------------------------------- x 100% = .... mg/100 ml lar. gelatin ml gelatin

  15. Pengaruh Suhu Inkubasi terhadap Aktivitas Enzim amilase Pengaruh temperatur : Makin tinggitemperatur Makin mudahrusak Enzimlebihstabilpada Temperatur yang rendah

  16. Prosedur

  17. Tugas : 1) Tentukan aktivitas enzim dengan rumus : 2) Buat kurva hubungan suhu inkubasi vs aktivitas enzim Absorbansi sampel – Absorbansi blanko Aktivitas Enzim (v) = --------------------------------------------------- Waktu inkubasi

More Related