Interações Antígeno-Anticorpo

1. Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia

2. Interações Ag - Ac • Ligações não covalentes • Reversíveis

3. Características das interações Ag-Ac Afinidade Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

4. Características das interações Ag-Ac Avidez - Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos Especificidade • - Capacidade do Ac distinguirseuimunógeno de outrosAgs.

5. Características das interações Ag-Ac • Reação cruzada • - Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente • semelhantes • - Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não • relacionado, mas com propriedades químicas similares.

6. Métodos • Reagentes não marcados • (A ligação do Ac altera o estado físico do Ag) • Reação de aglutinação • Reação de precipitação • Reagentes marcados • RIA • ELISA • IF, citometria de fluxo • Western Blotting

7. Reação de aglutinação (Ag insolúvel) Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos Passiva látex Qualitativos Semi-quantitativos Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções

8. Tipagemsanguínea

9. Inibição da Aglutinação

10. Reação de precipitação • Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac. • A medidaque a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitadotambémaumentaaté um máximo, paradepoisdiminuir. Precipitado visível

11. Precipitação em solução

12. Precipitação em gel Imunodifusão Radial

13. Precipitação em gel Imunodifusão Dupla

14. Reagentes marcados • Enzimas, fluorocromos, isótopos • Tipos: • RIA • ELISA • IF, citometria de fluxo • Western Blotting

15. Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para quantificar os ensaios. • Vantagens: – Alta sensibilidade – Permite medidas rápidas e precisas • Desvantagens: – Custo – Vida média dos reagentes – Riscooperacional (radiação)

16. - Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)

18. Imunofluorescência • - Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras • chamadas fluorocromos. • Visualização em microscópio de fluorescência

19. Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

20. Aplicações: • Detecção direta de microrganismos • (secreções, urina, cortes de tecidos); • Identificação de subpopulações de linfócitos; • Fenotipagem de células tumorais Imunofluorescência Direta Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral

21. Imunofluorescência Indireta • Aplicações: • Detecção de anticorpos específicos contra • diversos microrganismos; • Diagnóstico de doenças auto-imunes; Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi Detecção de Ac anti-nuclear

22. Citometria de fluxo • Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; • Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; • As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

23. Citometria de fluxo • As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser; • A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

24. - O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e aluz fluorescente emitida pode sermedida por um ou mais detectores.

25. CD4 • Aplicações: • Caracterização de populações celulares; • Contagem de microrganismos; • Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células; • - Análise de proliferação celular. CD8 CD19

27. Western Blot

28. Ensaios imunocromatográficos Teste rápido de HIV (Ac anti-HIV) Diagnóstico de gravidez ( detecção de beta HCG)

29. Técnicas de Biologia Molecular

30. Reação da Polimerase em Cadeia Amostra + Reagentes

31. RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)

32. Termociclador

33. Detecção da Amplificação Eletroforese em gel de poliacrilamida Produto (PCR ou RT-PCR)

34. Relatório • Qual a principal diferença entre osmétodos de ELISA e imunofluorescência? • 2. Emumatipagemsanguíneahouveaglutinaçãoao se misturar o sanguepesquisado e ossoros anti-AB e anti-Rh. Determine o tiposanguíneo e faça um esquemaexplicando a reaçãoocorrida. • Quais as características do anticorpoquepodeminfluenciar a sualigaçãoaoantígeno? • Aorealizarosexamespré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentouteste ELISA positivopara HIV. Como vocêinterpretaesteresultado? Descrevasuscintamente a reaçãoocorrida. • Qualimunoensaiovocêescolheriapara o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifiquesuaresposta.