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NAYELI RUIZ ROSAS PAULINA YOLTIC IVON BENITEZ MARTINEZ EQUIPO: 1

REACCION EN LA CADENA DE LA POLIMERASA. NAYELI RUIZ ROSAS PAULINA YOLTIC IVON BENITEZ MARTINEZ EQUIPO: 1. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA. Las técnicas en genética molecular eran muy laboriosas La mayoría tenia que ver con clonación o detección de genes

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NAYELI RUIZ ROSAS PAULINA YOLTIC IVON BENITEZ MARTINEZ EQUIPO: 1

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  1. REACCION EN LA CADENA DE LA POLIMERASA NAYELI RUIZ ROSAS PAULINA YOLTIC IVON BENITEZ MARTINEZ EQUIPO: 1

  2. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA • Las técnicas en genética molecular eran muy laboriosas • La mayoría tenia que ver con clonación o detección de genes • Desarrollada por KaryMullis en 1980 • Técnica “in vitro” que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN • Crea un gran numero de copias de un segmento de ADN en poco tiempo, sin necesidad de células vivas

  3. ¿Que se necesita? • Un pequeño segmento de ADN • Ciclos de desnaturalización • Apareamiento con cebadores () • Extensión por un ADN polimerasa termo-resistente

  4. Se debe de: • Conocer la secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento a amplificar • Se usan para diseñar dos oligonucleótidos sintéticos de ADN • Complementan una porción de cada una de las cadenas dela doble hélice

  5. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) • Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas nuevamente.

  6. Ciclo de amplificación Consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de temperatura llamados ciclos. Cada ciclo suele consistir en 2-3 pasos a diferentes temperaturas. La PCR común se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Los pasos de ciclos a menudo están precedidos por un choque térmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90 °C), y seguido por otro hold al final del proceso para la extensión de producto final.

  7. Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas : • Desnaturalización: El DNA molde es incubado a alta temperatura (92-98 °C, de 30 a 90 seg.) • Alineamiento: Se produce la hibridación del cebador. Para ello es necesario bajar la temperatura a (40-68 °C durante 20-40 seg.) • Elongación: Actúa la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN.

  8. Aplicación de la RCP. • Clonación. • Análisis y cuantificación de la expresión genética. • Diagnostico clínico. • La amplificación por RCP. • Características de la evaluación

  9. CONTAMINANTES • El RCP puede sintetizar copias del ADN tantas veces se requiera de manera in vitro • Gracias a dicho proceso es posible estudiar los distintos genes que codifican para cada proteína • En la microbiología: el rcp se utiliza para la detección de virus o bacterias las cuales no son detectados con reactivos o su aislamiento y cultivo es mas complicado y lento.

  10. En la evolución también se a utilizado el rcp para completar arboles filogenéticos. • Como herramienta para el estudio de animales en vías de peligro de extinción.

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