روش های شناسایی آزمایشگاهی دکتر سعید مویدنیا

1. روش های شناسایی آزمایشگاهی دکتر سعید مویدنیا

2. عناوین: • از چه روشهایی برای بررسی آزمایشگاهی تستهای روماتولوژی استفاده می شود؟ • تفاوت روشهای مذکور در چیست و کدام ارجحند؟ • رعایت کدام عوامل پیش آزمونی مهمند؟ چه عواملی در آزمونهای مذکور تداخل دارند؟ • چکونه به وجود تداخلات پی ببریم؟ • رفع تداخلات چگونه امکان پذیر هستند؟

3. از چه روشهایی برای بررسی آزمایشگاهی تستهای روماتولوژی استفاده می شود؟ عمدتا از روشهای سنجش ایمنی immunoassay می باشد.

4. Ab (Label) I…MA

5. Ag (Label) …IA

6. تفاوت روشهای مذکور در چیست و کدام ارجحند؟ • نوع لیبل به کار رفته متفاوت است.

7. جایگاه نشاندار سازی متفاوت است .آنتی ژن ( رقابتی )

8. آنتی بادی ( ساندویچی )

9. کدام روش بهتر است؟ • Imprecision • Gole dependency • Work of renge • robatsness • sensivity

10. رعایت کدام عوامل پیش آزمونی مهمند؟ • نوع نمونه؟ • زمان نمونه گیری؟ • نگهدارنده؟ • نگهداری؟ • مصرف دارو؟ • ایکتر، لیپمیک، همولیز؟

11. کسب نتایج منفی کاذب در غلظت بالای انالیترا پدیده هوک یا قلاب گویند

12. Y Y Y Y

13. Y Y Y Y Y

14. Y Y Y Y Y Y

15. Y Y Y Y Y Y

16. Y Y Y Y Y Y

17. Hook Effect

18. Hetrophil antibody effect

19. آنتی ژن نشاندار Competitive Binding Reaction آنتی ژن بیما ر آنتی بادی نشاندار آنتی بادی بيمار

20. آنتی ژن آنتی بادی بيمار آنتی – آنتی بادی نشاندار Non-competitive Binding Reaction آنتی ژن بیمار آنتی بادی اختصاصی نشاندار منوکلونال آنتی بادی ضد آنتی ژن

21. آنتی بادی بيمار Antibody capture Method آنتی ژن آنتی- آنتی بادی منوکلونال آنتی بادی نشاندار

22. نکات عملی که باید در آزمایش الایزا رعایت نمود: انجام کلیه مراحل آزمایش طبق دستور کیت رساندن کیت به دمای اتاق قبل از شروع کار تنظیم دمای انکوباسیون برگرداندن استریپهای اضافی به داخل کیسه حاوی رطوبت گیرو بستن درب آن استفاده از نوک سمپلرجدید برای هر نمونه یا محلول برای جلوگیری از آلودگی

23. نوک سمپلر بر سرسمپلرمحکم شده باشد. اجتناب ازایجاد کف وحباب در هنگام افزودن مواد ازپاشیدن نمونه یا محلولها به دیواره چاهک وسایرچاهکها اجتناب شود. تنظیم تایمروثبت زمان شروع انکوباسیون

24. کاردستگاه شستشوراچک کنید(ازنظرانسدادکانالهای شستشوواسپیراسون ناکامل) محلول شستشوبه چاهکهای مجاورسرازیرنشود. تکرارشستشوبه دفعات توصیه شده گرفتن ذرات باقیمانده با کاغذ نم گیردرانتهای شستشو کف چاهکها خشک نشود.

25. تهیه و استفاده ازسوبسترا طبق دستورسازنده اجتناب ازآلوده شدن محلول سوبسترا با نوک سمپلرآلوده

26. Common enzymes • Horseradish Peroxidase • Alkaline Phosphatase

27. Immunochemical tests for infectious disease can be : • Qualitative • Semi Quantitative • Quantitative.

28. Microplate Reader • wavelength range to that used in ELISA, generally between • 400 to 750 nm (nanometres) • Some readers (ultraviolet range between 340 to 700 nm.

29. Microplate Reader INSTALLATION REQUIREMENTS 1. A clean, dust free environment. 2. A stable work table away from equipment that vibrates (centrifuges, agitators). 3. An electrical supply source, which complies with the country’s norms and standards.

30. Pipettes and Best pipetting practice Manual single channel Manual multi channel Electronic single channel Electronic multi channel

31. GUIDE TO PIPETTING ONLY USE FIRST STOP ! DO NOT DRIP DO NOT PRESS HARD INTO WELL DO NOT USE TOO ACUTE AN ANGLE MAKE SURE TIP TOUCHES SIDE OF WELL AND LIQUID PIPETTING

32. Pipetting tips • Forward Pipetting technique

33. Pipetting tips • Reverse Pipetting technique • Highly viscous fluid • Avoid foaming

34. مقادير ناهماهنگ يا نتايج غير منتظره وغير طبيعي در آزمايشاتایمنواسی ممكنست نشاندهنده تداخل تكنيكي و يا يك وضعيت باليني نادر باشد • از آنجایی که شدت تداخل در روشهای مختلف متفاوت است، گاهي سنجش نمونه با روشی ديگر, موجب تشخيص تداخل مي‌شود.

35. ELISA VIDEO

36. فلورسنت میکروسکوپی

37. Fluorescence immunoassays • FIA based on labeling immunoreactants with fluorescent probes. • Detection and quantitation of Drugs, Hormones, Proteins,etc,

40. Ultra Violet spectrum By convention, the ultraviolet spectrum is broken into arbitrary divisions: • Long wave or "UVA“ (~400—350 nm) • Mid wave or "UVB" (~350—300 nm) • Short wave or "UVC" (~300—200 nm) • Far ultraviolet (<200 nm)

41. Since ultraviolet light is invisible, the visible (fluorescent) result may appear as if by "magic" when viewed in a darkened room.

42. Fluorescence Stokes Shift • is the energy difference between the lowest energy peak of absorbence and the highest energy of emission Stokes Shift is 25 nm Fluorescein molecule 520 nm 495 nm Fluorescnece Intensity Wavelength

43. 350 457 488 514 610 632 300nm 400nm 500nm 600nm 700nm Common Laser Lines PE-TR Conj. Texas Red PI Ethidium PE FITC cis-Parinaric acid

44. Characteristics of IFA OR FIA 1- Specificity 2- Sensitivity 3- Rapidity 4- Cost effectiveness 5.- Subjectivity

45. Fluorescent Microscopy • Specification of microscopes • Slides and cover glasses • Immersion oil • Mounting media

46. Fluorescent Microscope : • Early fluorescence microscope utilized transmitted light with oil darkfield sub stage condensers • Epifluorescence microscope Advantages : • The objectives serve as condenser • The area of illumination is restricted to the area being observed • Bright illumination

49. Fluorescence Microscope with 35 mm Camera Color Video (CCD)

50. Fluorescent Microscope Arc Lamp EPI-Illumination Excitation Diaphragm Excitation Filter ic Ocular ObjDichroic Filter ective Emission Filter