1 / 39

ELVÁLASZTÁSTECHNIKAI MÓDSZEREK ELMÉLETE ÉS GYAKORLATA Dr. Kremmer Tibor

ELVÁLASZTÁSTECHNIKAI MÓDSZEREK ELMÉLETE ÉS GYAKORLATA Dr. Kremmer Tibor IX. KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA KROMATOFOKUSZÁLÁS IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA EÖTVÖS LORÁND TUDOMÁNY EGYETEM Budapest – 2013. KIRÁLIS ZÁRVÁNY - KOMPLEX

thom
Download Presentation

ELVÁLASZTÁSTECHNIKAI MÓDSZEREK ELMÉLETE ÉS GYAKORLATA Dr. Kremmer Tibor

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. ELVÁLASZTÁSTECHNIKAI MÓDSZEREK ELMÉLETE ÉS GYAKORLATA Dr. Kremmer Tibor IX. KIRÁLIS, ZÁRVÁNY-KOMPLEX KROMATOGRÁFIA KROMATOFOKUSZÁLÁS IMMOBILIZÁLT FÉMION AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA EÖTVÖS LORÁND TUDOMÁNY EGYETEM Budapest – 2013

  2. KIRÁLIS ZÁRVÁNY - KOMPLEX KROMATOGRÁFIA

  3. A KIRALITÁS ELVE Glicerinaldehid Enantiomerek

  4. ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIÁVAL KÖZVETETT MÓDSZEREK SZÁRMAZÉK KÉPZÉS KOVALENS KÖTÉSSEL, KIRÁLIS VEGYÜLETTEL ELVÁLASZTÁS NORMÁL, VAGY FORDÍTOTT FÁZISON FIZIKAI-KÉMIAI TULAJDONSÁGOK ELTÉRÉSE ALAPJÁN Pl. MARFEY – REAGENS (1-FLUORO-2,4 DINITROFENIL 5 L-ALANIN ELŐNYÖK KÖVETELMÉNYEK REAGENS OPTIKAI TISZTASÁGA, KROMOFOR CSOPORT IGÉNYE, MINDKÉT ANTIPÓD KELL, REPRODUKÁLHATÓ-KVANTITATÍV REAKCIÓ, STABIL, EGYSÉGES SZÁRMAZÉK-TERMÉK REAKCIÓ SEBESSÉG NEM BEFOLYÁSOL, KROMATOGRÁFIA KÖRÜLMÉNYEIVEL JÓL OPTIMÁLHATÓ, SZELEKTIVITÁS, DETEKTÁLÁS NÖVELHETŐ, MINTA ELŐTISZTÍTHATÓ, ANTIPÓDOK KÜLÖN ALKALMAZHATÓK

  5. ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIÁVAL KÖZVETLEN MÓDSZEREK KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA CIKLODEXTRINEK - KORONAÉTEREK KOMPLEX - IONPÁR KÉPZŐK EGYÉB LIGANDUMOK AZ ÁRAMLÓ FÁZISBAN (dinamikus módszerek) AZ ÁLLÓ FÁZISON KÖTVE – KIRÁLIS ÁLLÓ FÁZISOK (sztatikus módszerek)

  6. KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIA KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA AZ ÁRAMLÓ FÁZISBAN ZÁRVÁNY KOMPLEX KÉPZŐK CIKLODEXTRIN SZÁRMAZÉKOK, KORONA ÉTEREK TERNER KOMPLEXEK (FÉMION – KIS LIGANDUM - ENANTIOMER) DIASZTEREOMER – IONPÁR KÉPZŐ KOMPLEXEK AZ ÁLLÓ FÁZIS FÁZIS FELÜLETÉN KIRÁLIS ELLENIONNAL (KÁMFOR SZULFONSAV, KININ-KINIDIN, PIRROLIDIN KARBONSAVAK)

  7. KIRÁLIS (ZÁRVÁNY - KOMPLEX) KROMATOGRÁFIA KIRÁLIS ADALÉKANYAGOK ALKALMAZÁSA AZ ÁLLÓ FÁZISBAN KIRÁLIS ÁLLÓ FÁZISOK ZÁRVÁNY KOMPLEX KÉPZŐK (KOVALENSEN KÖTÖTT CIKLODEXTRIN SZÁRMAZÉKOK, KORONAÉTEREK) PIRKLE-TIPUSÚ FÁZISOK (3,5-DINITRO-BENZIL l-AMINOSAV) CELLULÓZ ALAPÚ FÁZISOK (ACETÁT, KARBAMÁT, IZOTIOCIANÁT,BENZOÁT ÉSZTEREK) MAKROCIKLUSOS GLIKOPEPTIDEK (VANCOMYCIN) FORDÍTOTT (REVERSED) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIÁS FÁZISOK - MAKROMOLEKULÁRIS KÖTÖTT LIGANDUMOK (ALBUMIN, AGP, OVOMUKOID, AVIDIN, KIMOTRIPSZIN, STB.) LIGANDUM CSERE ELVÉN ALAPULÓ FÁZISOK

  8. ZÁRVÁNY-KOMPLEX KÉPZŐK A KIRÁLIS KROMATOGRÁFIÁBAN KORONA ÉTEREK CIKLODEXTRINEK

  9. A KIRÁLIS KÖLCSÖNHATÁSOK 3 PONTOS SZABÁLYA A KIRÁLIS KÖLCSÖNHATÁSOK TIPUSAI DIPOL – DIPOL - (SAV-BÁZIS) H – DONOR, AKCEPTOR TÉRIGÉNY GÁTLÁS ZÁRVÁNY KÉPZŐDÉS KOMPLEX KÉPZÉS, LIGANDUM CSERE, KIRÁLIS KÖRNYEZET (HELIX) AROMÁS GYŰRŰ HATÁSOK, MEREV MOLEKULA SZERKEZET

  10. A CIKLODEXTRINEK SZERKEZETE

  11. RÖGZÍTETT MÁSODLAGOS (C2-C3) HIDROXIL CSOPORTOK HIDROFÓB ÜREG ROTÁLHATÓ PRIMER (C6) HIDROXIL CSOPORTOK

  12. A ciklodextrinek térbeli modellje

  13. GABA-RECEPTOR SPECIFIKUS ANALOG VEGYÜLET (rac-NSC 382) enantiomerek (R, S) elválasztása CELLULÓZ-p-METIL BENZOESAV ÉSZTER OSZLOPON (CHIRALCEL OJ, DAICEL) MolnárT, Visy J et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008)

  14. Fitos, I., Visy, J., Simonyi, M. and Hermansson, J. (1995). Separation of enantiomers of benzodiazepines on the Chiral-AGP column. J. Chromatogr. A, 709, 265-273. Oxazepam enantiomerek (R, S) királis elválasztása BSA-HPLC oszlopon (0,01M foszfát puffer, pH: 7,0 2% ACN) Fitos I, Visy J, Simonyi M. J. Biochem. Biophys. Methods (2002) rac-NCS 382

  15. rac-Oxazepam és rac-oxazepam hemiszukcinát enantiomerek elválasztása Chiral-AGP oszlopon(0,01M foszfát puffer, pH:7,0 5% ACN) Fitos I, Visy J. et al. J Chromatogr. (1995) rac-NCS 382

  16. KÜLÖNBÖZŐ HIDANTOIN ÉS BARBITURÁT SZÁRMAZÉKOK KIRÁLIS ELVÁLASZTÁSA ChiraSep DN BP6 OSZLOPON (HEXÁN-2-PrOH-ACN)

  17. KROMATOFOKUSZÁLÁS CHROMATOFOCUSING

  18. KROMATOFOKUSZÁLÁS SLUYTERMAN (1977) KROMATOGRÁFIÁS ELVÁLASZTÁS IZOELEKTROMOS PONT(pI)ALAPJÁN pH GRADIENS ELŐÁLLÍTÁSA IONCSERE ELVÉNEK FELHASZNÁLÁSA GÉLKROMATOGRÁFIA ELVÉNEK FELHASZNÁLÁSA

  19. KROMATOFOKUSZÁLÁS GRADIENS KÉPZÉS (pH, IONERŐSSÉG, KONCENTRÁCIÓ, POLARITÁS) pH B > A A B V

  20. KROMATOFOKUSZÁLÁS - pH-GRADIENS KÉPZÉS

  21. KROMATOFOKUSZÁLÁS A pHGRADIENS ALKALMAZÁSÁNAK MÓDJAI IONCSERÉLŐ - GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETBE VEZETETT pH GRADIENS IONOS (IONCSERÉLŐ) TÖLTETEN AMFOLITTAL KIALAKÍTOTT pH GRADIENS INERS HORDOZÓN (GÉLSZEMCSE) KOVALENS KÖTÉSSEL RÖGZÍTETT (IMMOBILIZÁLT) pH GRADIENS

  22. KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐ – GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETEN ELŐFELTÉTELEK AZ IONCSERÉLŐ AZ ELVÁLASZTÁS TELJES pH TARTOMÁNYÁBANÁLLANDÓ (POZITÍV VAGY NEGATÍV) TÖLTÉSŰ LEGYEN A FEHÉRJÉK BIZTOSAN KIZÁRÓDJANAK A GÉLSZEMCSÉK PÓRUSAIBÓL A pH GRADIENS OPTIMÁLIS SZAKASZA MEGFELELJEN A FEHÉRJÉK IZOELEKTROMOS PONTJÁNAK A FEHÉRJÉK IZOELEKTROMOS PONTJA AZ ELVÁLASZTÁS pH TARTOMÁNYÁNAK KÖZEPÉN LEGYEN

  23. + + + 4 5 6 7 pI + + + + + 4,9 (3X) + 5,0 pH + + + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 1

  24. + pI 4 5 6 7 (3X) + + + + + + 4,9 + + + pH + 5,0 + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 2

  25. + pI + 4 5 6 7 + 4,9 0 0 0 + pH + + + + 5,0 + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 3

  26. + pI + 4 5 6 7 + 4,9 + pH - - - 0 0 0 + 5,0 + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 4

  27. + pI + + 4 5 6 7 4,9 + pH 0 0 0 +    5,0 + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 5

  28. + pI + + 4,9 4 5 6 7 + pH - - - + 5,0 0 0 0 + + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 6

  29. + pI + + 4,9 4 5 6 7 + pH 0 0 0 + 5,0 + - - - + Áramlás iránya KROMATOFOKUSZÁLÁS - 7

  30. KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐ – GÉLKROMATOGRÁFIÁS TÖLTETEN ELŐFELTÉTELEK A FEHÉRJE IZOELEKTROMOS PONTJA AZ ELVÁLASZTÁS pH TARTOMÁNYÁNAK KÖZEPÉN LEGYEN AZ IONCSERÉLŐ AZ ELVÁLASZTÁS TELJES pH TARTOMÁNYÁBANÁLLANDÓ (POZITÍV VAGY NEGATÍV) TÖLTÉSŰ LEGYEN A FEHÉRJE BIZTOSAN KIZÁRÓDJON A GÉLSZEMCSÉK PÓRUSAIBÓL A pH GRADIENS OPTIMÁLIS SZAKASZA MEGFELELJEN A FEHÉRJE IZOELEKTROMOS PONTJÁNAK

  31. KROMATOFOKUSZÁLÁS IONCSERÉLŐN AMFOLITTAL MULTIFUNKCIÓS ANIONCSERÉLŐ OSZLOPEGYENSÚLYBA HOZVA pH = 7 PUFFERREL ELÚCIÓ (MINTA FELVITEL) MEGFELELŐ pI - TARTOMÁNYÚ AMFOLITOT (AMFOTER POLIELEKTROLIT) TARTALMAZÓ pH = 4,2 PUFFERREL AZ ELUCIÓ SORÁN AZ AMFOLIT MEGTITRÁLJA AZ IONCSERÉLŐT ÉS pH-GRADIENST HOZ LÉTRE, AMELYBEN A FEHÉRJE MOLEKULÁK pI ÉRTÉKÜKNEK MEGFELELŐEN KÖTÖDNEK ÉS KÜLÖNBÖZŐ RETENCIÓVAL OLDÓDNAK LE

  32. REFERENCIA FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL (Cytochrom C – Ribonuclease – Lentil-lectin)

  33. L – Aminosav oxidáz izoenzimek elválasztása kromatofokuszálással Mono P oszlopon

  34. HAEMOGLOBIN VARIÁNSOK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

  35. IZOM FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

  36. TOJÁS FEHÉRJÉK ELVÁLASZTÁSA KROMATOFOKUSZÁLÁSSAL

  37. IMMOBILIZÁLT FÉM ION (KELÁT - KOMPLEX) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA IMAC IMMOBILIZED METAL ION AFFINITY CHROMATOGRAPHY

  38. IMMOBILIZÁLT FÉM ION (KELÁT-KOMPLEX) AFFINITÁSI KROMATOGRÁFIA IMAC

More Related