Labo de Microbiologie (BIO 3526)

1. Labo de Microbiologie (BIO 3526)

2. Mes coordonnées • Enseignant : John Basso • Courriel : jbasso@uottawa.ca • Bureau : Bioscience 102 • Tél. : 613-562-5800 poste 6358 • Page web : http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/accueil.htm

3. Mes disponibilités • Courriel : • Toute la semaine avant 5h • Tél. : • LUN - VEN : 9-5

4. Évaluation du cours • Quiz • 2 points boni pour 100% sur 4/8 quiz • Devoirs 20% • 2 Rapports 10% • Mi-session 25% • Présentations 3MT 10% • Examen pratique • En labo 5% • Entrevue 5% • Examen final 25%

5. Survol de la page web • http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/accueil.htm

6. Microbiologie Travailler dans le labo de microbiologie

7. Au début du labo • Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire • Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

8. Avant de commencer – À la fin • Faire la désinfection de votre espace de travail • Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

9. Avant de quitter le labo • Se laver les mains avant de quittez le laboratoire • Aide à prévenir la contamination de l’environnement

10. Travailler en Microbiologie Technique Stérile

11. Le Matériel • Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile • Milieu de culture • Éprouvettes • Assiettes de Pétris • Boucle d’ensemencement/inoculation • Etc.

12. Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes • Préviens la contamination de vos cultures • Préviens la contamination de votre environnement • Préviens la contamination de soi • Toutes les bactéries sont des opportunistes

13. Transferts par la Technique Stérile • Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur • Le fil entier doit devenir rouge • Ne pas déposer sur la table! • Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

14. Transferts par la Technique Stérile • Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation • Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

15. Transferts par la Technique Stérile • Chauffer l’ouverture du tube au bruleur • Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible • Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

16. Transferts par la Technique Stérile • Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum • Liquide de bouillons • Solide de géloses • Solide de pentes Retirer l’inoculum

17. Transferts par la Technique Stérile • Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! • Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

18. Transferts par la Technique Stérile • Remettre le capuchon sur la culture pure • Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

19. Inoculation Transferts par la Technique Stérile • Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube • Retirer capuchon • Chauffer l’ouverture • Inoculer • Chauffer l’ouverture • Fermer le tube

20. Travailler avec des solutions

21. Définitions • Solution • Mélange de 2 substances ou plus dans une phase unique • Solution composée de deux composantes • Le soluté • Partie qui est dissoute ou diluée – Habituellement la plus petite quantité • Le solvant (ou Diluent) • Partie de la solution dans laquelle le soluté est dissout – Habituellement le plus grand volume

22. Concentrations • Concentration = Quantité de soluté Quantité de solution (Pas solvant) • Quatre façons d’exprimer les concentrations: • Concentration Molaire (Molarité) • Pourcentages • Masse par volume • Rapports

23. Molarité • No de Moles de soluté/Litre de solution • Masse de soluté/PM de soluté = Moles de soluté • Moles de soluté/vol en L de solution= Molarité

24. Pourcentages • Les concentrations en pourcentage peuvent être exprimé en tant que : • V/V – volume de soluté/100 ml de solution • m/m – Masse de soluté/ 100g de solution • m/V – Masse de soluté/100 ml de solution • Tous représentent des fractions de 100

25. Pourcentages (suite) • %V/V • Ex. 4.1L soluté/55L solution =7.5% • Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas! • % m/V • Ex. 16g soluté/50ml solution =32% • Dois avoir des unités du même ordre de grandeur en haut et en bas! • % m/m • Ex. 1.7g soluté/35g solution =4.9% • Dois avoir les mêmes unités en haut et en bas!

26. Masse par volume • Une quantité de masse par un volume • Ex. 1kg/L • Connaître la différence entre une quantité et une concentration! • Dans l’exemple ci-dessus 1 litre contient 1kg (une quantité) • Quelle quantité retrouverait-on dans 100ml? • Quel est le pourcentage (m/v) de cette solution? 100g 100%

27. Les Rapports • Façon d’exprimer la relation entre différents constituants • Exprimé d’après le nombre de parties de chaque composante • Ex. 24 ml de chloroforme + 25 ml de phénol + 1 ml d’isoamylalcool • Donc 24 parties + 25 parties + 1 partie • Rapport: 24:25:1 Combien de parties au total? 50

28. Les Dilutions Réduire une Concentration Une Fraction

29. Dilutions • Dilution = produire des solutions plus faibles à partir de solutions plus fortes • Exemple : Faire du jus d’orange à partir de concentré. Mélanger une cannette de jus d’orange concentré avec trois (3) cannettes d’eau

30. Dilutions (suite) • Les dilutions sont exprimées comme une fraction du nombre de parties du soluté sur le nombre total de parties de la solution (parties de soluté + parties de solvant) • Dans l’exemple du jus d’orange, la dilution serait exprimée comme 1/4, pour une cannette de jus (1 partie) à un TOTAL de quatre parties de solution (1 partie de jus + 3 parties d’eau)

31. Un autre exemple • Si vous diluez 1 ml de sérum avec 9 ml de saline, la dilution serait écrite 1/10 ou dite « un dans dix », car vous exprimez le volume de la solution étant diluée (1 ml de sérum) par le volume final TOTAL de la dilution (10 ml totaux).

32. Un autre exemple  • Une (1) partie d’acide concentré est diluée avec 100 parties d’eau. Le volume total de la solution est 101 parties (1 partie d’acide + 100 parties d’eau). La dilution est écrite comme 1/101 ou dite “un dans cent un ”.

33. Dilutions (suite) • Les dilutions sont toujours une fraction qui décrit la relation d’UNE partie de soluté sur un nombre total de parties de solution • Donc le numérateur de la fraction doit être 1 • Si plus d’une partie de soluté est diluée, vous devrez transformer la fraction

34. Exemple • Deux (2) parties d’un colorant sontdiluées avec huit (8) parties de solvant • Le nombre de parties total de solution est 10 parties (2 parties de colorant + 8 parties de solvant) • La dilution estinitialementexpriméecomme 2/10 • Pour transformer la fraction afind’avoir un numérateur de un, utilisezuneéquation de rapport et de proportion : • La dilution estexpriméecommeétant 1/5

35. Problème • Deux parties de sang sont diluées avec cinq parties de saline • Quelle est la dilution? • 10 ml de saline sont ajoutés à 0,05 L d’eau • Quelle est la dilution? 2/(2+5) = 2/7 =1/3.5 • 10/(10+50) = 10/60=1/6

36. Problème : Plus d’un ingrédient • Une partie de saline et trois parties de sucre sont ajoutées à 6 parties d’eau • Quelles sont les dilutions • Comment est-ce que vous prépareriez 15mL de cette solution? • Exprimer chaque composante sur le même dénominateur commun! Saline: 1/(1+3+6) = 1/10 • Sucre: 3/(1+3+6) 3/10 = 1/3.3 Saline: 1/10 + Sucre 3/10 = 1.5/15 + 4.5/15

37. Dilutions en Série • Dilutions faites à partir de dilutions • Les dilutions sontmultiplicatives • Ex. • A1: 1/10 • A2: 1/4 • A3: 0.5/1.5 = 1/3 • La dilution finale de la série = (A1 X A2 X A3) = 1/120

38. Le Facteur de Dilution • Représente l’inverse de la dilution • Exprimé comme le dénominateur de la fraction suivi de “X” • EX. Une dilution de 1/10 représente un facteur de dilution de 10X • Le facteur de dilution permet de déterminer la concentration originale • Conc. finale X le facteur de dilution = conc. initiale

39. = Déterminer le facteur de réduction (Le facteur de dilution) Qu’est que j’ai Qu’est que je veux Déterminer la fraction requise (La Dilution) Ex. Vous avez une solution de 25 mg/ml et vous voulez obtenir une solution de 5mg/ml = Donc le facteur de réduction est de: 25mg/ml 5 (Facteur de dilution) 5mg/ml La fraction est égale à 1/le facteur de dilution= 1/5 (la dilution)

40. Déterminer les quantités requises • Ex. Vous désirez 55 ml d’une solution qui représente une dilution de 1/5 • Utilisez une équation de rapport et de proportion: • 1/5 = x/55 = 11/55 • Donc 11 ml de soluté / (55 ml – 11 ml) de solvant • = 11 ml de soluté / 44 ml de solvant

41. Problème • Préparer 25mL d’une solution de 2mM à partir d’un stock de 0.1M • Quel est le facteur de dilution requis? • Quelle est la dilution requise? • Quelles volumes de solvant et de soluté sont requis? 50 1/50 • Soluté 0.5ml • Solvant 24.5ml

42. Problème • Combien d’une solution de HCl de 10M est-ce que vous devez ajouter à 18mL d’eau afin d’obtenir une solution de 1M? • Quelle est la dilution requise? • Quels volumes de solvant et de soluté sont requis? 1/10 • 1 partie Soluté / 10 parties de Solution • 1 partie Soluté / 1 partie Soluté + 9 parties Solvant • Donc 9 parties de solvant = 18mL ou 1 partie = 2mL