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SEMINARIO 1. MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

SEMINARIO 1. MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. Evaluación de pruebas diagnósticas Tinción de Gram Diagnóstico microbiológico de las E.T.S producidas por Chlamydia Trachomatis Diagnóstico de la tuberculosis Diagnóstico infección por VIH. Utilización de una técnica diagnóstica.

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SEMINARIO 1. MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

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  1. SEMINARIO 1. MICROBIOLOGÍA CLÍNICA • Evaluación de pruebas diagnósticas • Tinción de Gram • Diagnóstico microbiológico de las E.T.S producidas por Chlamydia Trachomatis • Diagnóstico de la tuberculosis • Diagnóstico infección por VIH

  2. Utilización de una técnica diagnóstica • Valoración previa de la probabilidad de que un paciente presente o no la enfermedad. • Planteamiento inicial antes de solicitar una prueba diagnóstica de cual va a ser nuestra actitud y decisión después del resultado de la misma • Conocimiento de la eficacia de la prueba a utilizar

  3. Sensibilidad Especificidad V.P. Positivo V.P. Negativo Eficiencia Relevancia clínica Verdadero positivo Verdadero negativo Falso Positivo Falso negativo PARÁMETROS DE UNA TÉCNICA DIAGNÓSTICA

  4. TINCIÓN DE GRAM. U.R.V. : 51 Complejidad Utilidad Relevancia Clínica Orina + + ± ± Ex. Uretral + + + + L.C.R. + + + + + + + Esputo + ± ±

  5. DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LAS E.T.S. PRODUCIDAS POR C.TRACHOMATIS

  6. Factores que afectan la eficacia de los métodos diagnósticos • Forma clínica • Tipo de muestra • Prevalencia de la infección • Obtención de la muestra • Calidad de la muestra • Sistema de transporte y conservación • Método diagnóstico

  7. Métodos Directos de Diagnóstico en las infecciones por C.trachomatis • Examen citológico • Giemsa - Papanicolau - I.F.D. • Cultivo • Detección de Antígenos • I.F.D. - E.I.A. - Rápidos • Detección Ac.Nucleicos • Hibridación - Amplificación

  8. Límites relativos de los métodos de detección de C.trachomatis Número de microorganismos por muestra 1 101 102 103 104 105 Amplificación ADN Cultivo IFD EIA Sonda ADN

  9. Limitaciones Sensibilidad: 75% (75-85%) Lentitud: 3-7 días Ventajas Pruebas de sensibilidad Genotipado Indicaciones M. uretrales (asintomáticos) M. nasofaríngeas M. rectales M. vaginales Victimas de abuso sexual Aislamiento en cultivo celular

  10. Limitaciones Gran experiencia Aplicable a pocas muestras Ventajas Sensibilidad 70-90% Calidad de la muestra Rapidez 30 minutos Indicaciones M. endocervicales M. uretrales Metodo confirmatorio Detección de antigenos por I.F.D.

  11. Limitaciones Sensibilidad: 60-70%  Especificidad (confirmación)  C.I. mayoría pacientes Variación entre sistemas R.cruzadas LPS No aplicables a prevalencias bajas Ventajas Rapidez 3h Objetivos/automatizables Gran nº muestras Detección de antigenos por E.I.A

  12. Sensibilidad relativa con respecto al estandar ampliado

  13. Métodos de amplificación de ácidos nucleicos • Sensibilidad 10-20% superior al cultivo • Especifidad exquisita • Aplicables a muestras no invasivas: • 1ª parte de la micción • Vaginales • Evaluación en muestras faríngeas y rectales • Coste elevado • Necesidad de controles internos

  14. Métodos diagnósticos directos para las infecciones por Chlamydia trachomatis

  15. Costes de las técnicas diagnósticas en la infección por C.trachomatis Técnica Coste/muestra Cultivo 22,56 $ EIA 1,59 $ EIA/IFD 2,78 $ PCR 6,66 $ LCR 6,92 $

  16. Selección de métodos diagnósticos • Asintomáticos(screening) • Baja prevalencia(< 5%). VPP(+): Bajo • Confirmación de (+) en m.de deteccción de Ag • Coste/beneficio rentable si gran nº de muestras • Sintomáticos • Cualquier método

  17. EPIDEMIOLOGÍA.U.S.A • 4.000.000 Personas afectadas • 1995: 477.638 casos reportados • Incidencia: 182,2 /105 • Prevalencia: 2,8-9,4% • Edad: 79% Menores 25 años • Coste anual: 2.200 millones $ • Coste PID año 2000: 9.000 millones $

  18. “Los métodos de amplificación de ácidos nucleicos deben ser considerados los métodos de elección para el diagnóstico de las infecciones por Chlamydia trachomatis” J.Schachter. Current Opinion in Infectious Diseases. 1999

  19. DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LA TUBERCULOSIS

  20. MÉTODOS DIAGNÓSTICOS • Tinciones: 5 x 103 - 104 (50-70%) • Cultivo: 10-100 bacterias ( 85%) • Técnicas de Amplificacion Ácidos Nucleicos (NAA): < 1-10 bacterias • Detección de antígenos • Detección de componentes (GC-TSA) • Diagnóstico serológico.

  21. CULTIVO • Métodos clásicos • Löwestwein-Jenssen con Piruvato: 18-24 días • Sistema radiométrico • Bactec460: 5-14 días • Sistemas automatizados alternativos • MGIT 960 • Bact-Alert • ESP-II

  22. IDENTIFICACIÓN Mycobacterium tuberculosis

  23. Evaluación global Sensibilidad 96% Especificidad 98-100% VP Positivo 93 VP Negativo 98-99%

  24. Variación en la sensibilidad en función de la sospecha clínica Catanzaro.JAMA.2000

  25. Variación en la especificidad en función de la sospecha clínica Catanzaro.JAMA.2000

  26. Variación del Valor Predictivo Positivo en función de la sospecha clínica Catanzaro.JAMA.2000

  27. Variación del Valor Predictivo Negativo en función de la sospecha clínica Catanzaro.JAMA.2000

  28. Valoración técnicas de amplificación • Muy eficaces en pacientes baciloscopia positiva • Alta e intermedia sospecha clínica: confirma el diagnóstico en horas (VPP alto) • baja probabilidad clínica de TBC (VPN alto) excluye diagnóstico • Baciloscopia negativa y amplificación positiva muy rentable • 50% de las tuberculosis son baciloscopia negativa • alta sospecha clínica, evita otras técnicas diagnósticas

  29. Meningitis tuberculosa • Sensibilidad respecto al cultivo:75%-83%-93% • Especificidad respecto al cultivo: 97-100% • Diagnóstico final: Meningitis Tuberculosa • Cultivo: 17% • Amplificación: 35% • Gran volumen 5ml • Interpretarse en unión otros datos clínicos y laboratorio. (Caws. 2000.J Clin Microbiol)

  30. DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE LA INFECCIÓN POR VIH

  31. Objetivos 1. Establecer la utilidad de cada una de las pruebas que se emplean para el diagnóstico serológico de la infección por VIH y valorar la significación de los resultados obtenidos. 2. Determinar los criterios para la elección de las pruebas para el diagnóstico y evolución de la infección VIH. 3. Recomendar estrategias de utilización de pruebas diagnósticas para el diagnóstico y evolución de la infección VIH en una persona, para la seguridad en donaciones y transfusiones y donaciones de órganos y para estudios epidemiológicos y de investigación.

  32. Características de las pruebas de CRIBADO de la infección VIH ESPECIFICIDAD +++ +++ ++++ ++ Poco valorada No suficient. valorada TIPO DE TECNICA EIA 1ªG EIA 2ª G EIA 3ª G AGLUTINACION EIA DE MEMBRANA FLUORIMETRICAP. SENSIBILIDAD ++ +++ ++++ +++ Poco valorada No suficientemente valorada

  33. Pruebas de CONFIRMACION serológica de la infección VIH CARACTERISTICA WB IFI RIPA Lectura Subjetiva* Subjetiva Subjetiva Automatización Parcial No No Dificultad Media Baja Alta Sensibilidad +++ ++ ++++ Especificidad ++++ ++ ++++ Rapidez ++ +++ +

  34. NEGATIVO LIA WB INDETERMINADO POSITIVO ALGORITMO DIAGNÓSTICO INFECCIÓN POR VIH-1 EN PACIENTES SIN ANTECEDENTES DE RIESGO REACTIVO MUESTRA EIA NEGATIVO

  35. NEGATIVO WB LIA INDETERMINADO POSITIVO ALGORITMO DIAGNÓSTICO INFECCIÓN POR VIH-1 EN PACIENTES CON ANTECEDENTES DE RIESGO REACTIVO MUESTRA EIA NEGATIVO

  36. Evolución de los marcadores de infección VIH

  37. Uso de la PCR en el diagnóstico de la infección por VIH • Primoinfección: Período ventana • Infección aguda • Accidente profesional • RN • Hipogammaglobulinemia • Transplantes

  38. Diagnóstico de la infección aguda por VIH Hecht FM, Busch MP, Rawal B, et al. Use of laboratory tests and clinical symptoms for identification of primary HIV infection. AIDS 2002, 16:1119-1129.

  39. PCR + en sujetos seronegativos PCR – en sujetos seropositivos Periodo ventana de la infección Transmisión pasiva de anticuerpos Infección por virus defectivos Error técnico Infección por cepas de virus poco replicativas Técnicas de baja sensibilidad Secuencias de otros retrovirus Mutaciones de zonas críticas Hipoganmaglobulinemia R actividad cruzada en pacientes con lupus eritematoso, fibrosis quística o vacuna de gripe (falsos + de los EIA) Contaminación de laboratorio Resultados discrepantes de PCR

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