ENDOTOXINES & DIALYSE

ENDOTOXINES & DIALYSE VDT dag 1 November 2006 Yvonne Bos Applicatie Specialist LAL Sanbio bv.

SANBIO BV. WWW.SANBIO.NL • Uden, sinds 1978, ISO 9001:2000 • 14 werknemers in 2006 • Distributeur in BeNeLux o.a. Charles River Endosafe • Pharmaceutische Industrie • Fresenius Be • Ziekenhuis Apotheken

ENDOTOXINES & DIALYSE • Wat zijn endotoxines • Endotoxines in de dialyse • Wat is de LAL test • PTS

WAT ZIJN ENDOTOXINES • Deeltjes van Gram negatieve bacteriën welke koorts op kunnen wekken bij de patient • Met name Lipopolysacharide (LPS) • LPS komt overal in onze omgeving voor • LPS is moeilijk te verwijderen!

ENDOTOXINES IN DE DIALYSE • EP/FDA limit: 5 EU/kg/uur • Persoon 70 kg * 5 EU/kg = 350 EU/uur • Heamodialyse: Flow 500 ml/min = 30 l • Hemo (dia) filtratie: Flow 350 ml/min = extra 21 l vloeistof • 30 l/uur -> limit 350 EU/ 30.000ml = 0,01 EU/ml • 51 l/uur-> limit 350 EU/ 51.000ml = 0,007 EU/ml • Volume dialyse  Endotoxine limiet 

ENDOTOXINES IN DE DIALYSE • Kwaliteitsrichtlijn Nederlandse Federatie voor Nefrologie , DGN-watercommissie • Achtergrond endotoxinen. • De maximale hoeveelheid endotoxinen waaraan een patiënt via de intraveneuze route mag worden blootgesteld bedraagt 5,0 IU/kg/uur. Bij hemo(dia)filtratie komen grote hoeveelheden vloeistof per dag in contact met het bloed van een patiënt, soms wel 60 liter per uur. De bepalingslimiet van de meest gevoelige gangbare test op bacteriële endotoxinen bedraagt 0,025 IU/ml. Wanneer wordt aangehouden dat de uitslag onder de detectielimiet dient te liggen,bedraagt bij een patiënt van 70 kg de belasting 1500 IU/uur dus 21 IU/kg/uur, dus veel meer dan de gewenste 5 IU/kg/uur. De beperkende factor is hier de gevoeligheid van de bepalingsmethode: de norm zou strenger moeten zijn, maar er is geen bepalingsmethode beschikbaar om zo’n strengere norm te controleren.

HET AANTONEN VAN ENDOTOXINES • Endotoxines worden aangetoond mbv. LAL test. • LAL: • Limulus - genus van “Horseshoe Crab” • Amoebocyte - bloedcellen krab • Lysate – bloedextract • LAL geeft een chemische reactie in de aanwezigheid van celdelen van gram negatieve bacteriën. • Deze reactie kan worden gemeten en gekwantificeerd

HORSESHOE CRAB/ DEGENKRAB • 150 miljoen jaar oud • Behoort tot de Spinachtigen • Komt voor aan de oostkust van de noordelijke continenten (US, China, Vietnam) • Legt gemiddeld 80,000 eieren gedurende paartijd in het voorjaar

HET VERKRIJGEN VAN HET LYSAAT • De krabben komen in het voorjaar aan land om te paren • Ze worden dan verzameld, geinspecteerd en gereinigd • Maximaal 25% van hun (blauwe) bloed wordt afgetapt • De krabben wordt snel terug gebracht naar zee • Charles River werkt nauw samen met plaatselijke autoriteiten om de populatie in stand te houden

DE LAL TEST • 5 Methodes: • Gel Cloth (tot 0,015 EU/ml) • Kinetisch Chromogeen (tot 0,005 EU/ml) • Kinetisch Turbidimetrisch (tot 0,005 EU/ml) • Chromogeen Endpoint (tot 0,012 EU/ml) • Portable Test System (tot 0,01 EU/ml)

DE LAL TEST OP DE APOTHEEK

DE LAL TEST OP DE APOTEEK • Afhankelijk van testschema lab -> resultaten binnen 3 dagen tot 2 weken • Resultaten zijn indicatie: LPS loopt soms af • “Correctie achteraf” • Laagst haalbare limiet 0,005 EU/ml • Let op monstername & Interference!

PORTABLE TEST SYSTEM (PTS) • Real time results -> binnen 15 min. Ter plaatse resultaat • Onafhankelijk van laboratorium • Minimale training • Monitoring!! • Laagst haalbare limiet 0,01 EU/ml

PTS TECHNOLOGIE

ASSAY PROCEDURE - Voer gegevens in als naam, lotnummer en sample ID - Voeg 25 µl sample toe aan de 4 channels - Lees na 15 min. de resultaten af

BEDANKT VOOR UW AANDACHT…… VRAGEN? Sanbio b.v., te UDEN, Tel. 0413 251115 ybos@sanbio.nl, www.sanbio.nl

ENDOTOXINES & DIALYSE