850 likes | 1.31k Views
HEMOFILIA. ENFERMEDAD DE VON WILLEBRAND. PREVALENCIA. Hemofilia A 1/5000 - Hemofilia B 1/25000 - VWD 3% poblaci ón. protómero dominios funcionales ligandos. Factor von Willebrand. Propéptido Subunidad Madura. I S. 1 2050.
E N D
HEMOFILIA ENFERMEDAD DEVON WILLEBRAND
PREVALENCIA • Hemofilia A 1/5000- Hemofilia B 1/25000 - VWD 3% población
protómero dominios funcionales ligandos Factor von Willebrand PropéptidoSubunidad Madura I S 1 2050 D1 D2 D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I S D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I RGD Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos
RETICULO ENDOPLASMICO GOLGI vWFEnsamble Multímeros Furina Sadler JE, 2005
Proteolisis aumentada (vWD2A) ADAMTS-13 kproteolisis Plasma Inicial vWFEnsamble y Catabolismo ksecreción kdepuración Depuración aumentada (vWD1 Vicenza) Sadler JE, 2005
FACTOR VIII NH 2 A1 A2 B A3 C1 C2 Secreción Preactivación Activación Inactivación 200kD 80kD IIa 1648 90kD HRG 80kD IIa 740 IIa 50kD 43kD 73kD 372 APC IIa Xa Xa 1689 45kD 67kD 336 1721 Lollar P & Parker CG, 1989
FVIII-VWF A1 A2 FVIIIa C2 C1 A3 IIa, FXa 372 A2 FVIII 740 A1 C1 A3 B VWF C2 1689 N N C C S-S S-S Vlot et al., 1998
FVIII/VWF - Propiedades FVIII VWF Clínica Hemofilia vWD Producción S. Hepáticos C. Endoteliales Megacariocitos Gen Cromosoma X Cromosoma 12 Molécula Heterodímero Multímero Función Coagulación Procofactor Adhesión Endotelio/Sub Transporta FVIII
HEMOFILIA A Recesiva Ligada al sexo (gen FVIIICr X) PORTADORA HEMOFILICO
HEMOFILIA Modo de Herencia
HEMOFILIA Modo de Herencia
HEMOFILIADiagnóstico “sencillo” - APTT prolongado- FVIII disminuido
HEMOFILIA - Clasificación Severa < 1% VIII Moderada 1-5% VIII Leve >5% VIII
PORTADORA OBLIGADA • Padre hemofílico • Hijo hemofílico y antecedentes (vía materna) • 2 o más hijos, sin antecedentes familiares No requiere estudio
PORTADORA POTENCIAL • Hijo hemofílico, sin antecedentes familiares • Sin hijos y con antecedentes (vía materna) Dificultad diagnóstica
PORTADORASLyonización Ovulo Fertilizado Heterocigota Clones XMXP XP XM XM XP XP XM XP XM XM XP XM XP
PORTADORAS HEMOFILIA Factor VIII Portadoras Normales probabilidad 50 100 FVIII
Bioensayos DESVENTAJAS • Probabilidad • Error por lyonización extrema
Análisis de ADN VENTAJAS • Certeza • Independiente de lyonización
Análisis de ADN Complejo • Alteración heterogénea • Afecta diferentesregiones del gen • No aplicable a todos los casos
-/+ - ? - -/- IDENTIFICACION INDIRECTA No Certeza Análisis de segregación de RFLP PORTADORA (-) asociado al defecto
IDENTIFIACION DIRECTA Inversión del intrón 22 ↓ 50% hemofílicos severos Certeza
IDENTIFIACION DIRECTA • Inversiones • Deleciones • Inserciones • Mutaciones “sin sentido” • Mutaciones “sentido falso”
HEMOFILIA B Recesiva Ligada al sexo (gen FIXCr X) PORTADORA HEMOFILICO
HEMOFILIA - Clasificación Severa < 1% IX Moderada 1-5% IX Leve >5% IX
HEMOFILIA BDiagnóstico “sencillo” - APTT prolongado- FIX disminuido
protómero dominios funcionales ligandos Factor von Willebrand PropéptidoSubunidad Madura I S 1 2050 D1 D2 D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I S D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I RGD Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos
VWDClasificación RevisadaSadler E, 1994 Tipo 1Deficiencia cuantitativa parcial Tipo 2Alteración cualitativa Tipo 3“Ausencia”de VWF
VWDGenética VWF Cromosoma 12 (12p1212pter)
VWD – TIPOSFrecuencia (%) Castaman G, 2003
VWD Serie 1885 Pacientes (Tipo I 91% ) • FVIII 61,6% • VWF:Ag 62,2% • TS 58,4% Woods AI, 2001
Modificadires Ambientales edad, género, trauma Enfermedad primariamutación Chance Niveles Variables VWF ? Genes modificadores Difícil Diagnóstico VWFExpresión VariablePenetrancia Incompleta Ginsburg D, 2001
VWF-Variabilidad • Individual • Familiar
VWF-Variabilidad • Factores • 40% no genéticos • 60% genéticos
VWF-Variabilidad • Factores no-genéticos • Edad • Estrés • Ejercicio • H. Tiroideas • Estrógenos • F.Aguda
VWF-Variabilidad • Factores genéticos • Grupo ABO 20-30% variabilidad Grupo “O” VWF Hipótesis Glicosilación Alteración • procesamiento • estabilidad • secreción
VWD Distribución según grupo ABO • “AB” 0,6% difícil diagnóstico • “O” 70% más sintomático > frecuencia de consulta Woods AI, 2001
VWFPruebas Específicas Cuantitativa Cualitativa VWF:Ag SI NO VWF:RCo SI SI VWF:CB SI SI Multímeros SEMI SI
VWF-ELISA 1 2 3 4 a-vWF vWF a-vWF-HRP Color-Abs 2. Incubación con muestra o control 1. Anti-VWF inmovilizado 3. Incubación con anti-VWF-conjugado 4. Incubación con sustrato cromogénico
VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente
VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina
VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina PRP Plaquetas del paciente Plasma del paciente
VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina PRP Plaquetas del paciente Plasma del paciente Ristocetina Agregometría
Normal Agregación c/Ristocetina vWD-Tipo 1 vWD-Tipo 2A vWD-Tipo 3 Kasper C, 2005
VWF:CB Unión Colágeno 1 2 Colágeno Tipo III BSA a-vWFconejo 3 4 Muestra Esferas poliestireno IgG F(ab’)2* 1. Inmovilización 5 6 2. Bloqueo 3. Colágeno VWF Citometría de flujo 4. VWF a-VWF 5. a-VWF IgGF(ab’)2fluoresceína 6. Adquisición
Actividad VWF-ELISA 1 2 3 4 a-vWF vWF a-vWF-HRP Color-Abs 1. AcMo a-vWFepitope funcional inmovilizado 2. Incubación con muestra o control 3. Incubación con anti-vWF-conjugado 4. Incubación con sustrato cromogénico
Agregación c/Ristocetina Kasper C, 2005